Mit mér a DSF?

A differenciális pásztázó fluorimetria (DSF) a fehérje kibontakozását méri a fluoreszcencia változásainak a hőmérséklet függvényében történő figyelésével . A hagyományos DSF hidrofób fluoreszcens festéket használ, amely kötődik a fehérjékhez, amikor azok kibontakoznak. A NanoDSF méri a fehérje belső fluoreszcenciájának változásait a fehérjék kibontakozása során.

Mi a fehérje olvadáspontja?

Ezeknek a fehérjéknek az olvadáspontja nagyon széles spektrumot képvisel, és 25 °C és 113 °C között változik. A fehérjeszekvenciákat ezután felhasználják a szekvenciavezérelt jellemzők két csoportjának származtatására, nevezetesen az aminosav-összetételre (AAC) és a pszeudoaminosav-összetételre (PseudoAAC) a fehérjék jellemzésére.

Hogyan működik a fluoreszcencia polarizáció?

A fluoreszcencia polarizáció alapelve. A fluorofórt olyan fénnyel gerjesztik, amely lineárisan polarizált egy gerjesztési polarizáló szűrőn való áthaladással ; a polarizált fluoreszcenciát egy emissziós polarizátoron keresztül mérjük, akár párhuzamosan, akár merőlegesen a gerjesztő fény polarizációs síkjával.

Melyik a fluorimetriás műszer változata?

A fluorométereknek két alapvető típusa van: a szűrős fluorométer és a spektrofluorométer . A különbség köztük az, ahogyan kiválasztják a beeső fény hullámhosszait; a szűrős fluorométerek szűrőket, míg a spektrofluorométerek rácsos monokromátorokat használnak.

Mi az a hőstabilitási vizsgálat?

A hőeltolódásos vizsgálatok differenciális pásztázó fluorimetriát (DSF) használnak a célfehérje termikus stabilitásának és a fehérje olvadási hőmérsékletének növekedésének mérésére stabilizálószer kötésekor. Hasznos a fehérje stabilitását befolyásoló ligandumok, pufferkörülmények és kofaktorok azonosítására.

Mi az a CPM-vizsgálat?

Egy népszerű hőstabilitási vizsgálat , amelyet kifejezetten a membránfehérjék tanulmányozására fejlesztettek ki, tiol-specifikus próbát, a 7-dietilamino-3-(4-maleimidofenil)-4-metilkumarint (CPM) használnak. ... A detergens jelenlétéből eredő esetleges műtermékek kiküszöbölése érdekében két oldható fehérje kibontakozását figyeltük meg.

Hogyan működnek a hőeltolódási vizsgálatok?

Elvileg ez a vizsgálat úgy működik, hogy a fehérje olvadási hőmérsékletét használja a hőstabilitás mérésére . ... Ahogy egy fehérjét felmelegítenek ennek a festéknek a jelenlétében, a fluoreszcens jel a fehérje kibontakozásával növekszik, lehetővé téve a hőmérséklet függvényében a fluoreszcenciát az olvadási hőmérséklet leolvasásaként.

Mi az a DSF biológia?

A differenciális pásztázó fluorimetria (DSF) egy olyan módszer, amely lehetővé teszi a fehérje látszólagos olvadási hőmérsékletének (Tm _a ) gyors meghatározását. Nagy áteresztőképességének köszönhetően a DSF széles körben elterjedt a szerkezetbiológiától a kémiai szűrésig.

Hogyan mérjük a fluoreszcencia anizotrópiát?

Mérhető úgy, hogy a gerjesztő polarizátort vízszintes irányba mozgatja, és összehasonlítja az intenzitásokat , amikor az emissziós polarizátor függőlegesen és vízszintesen polarizált. G emissziós hullámhossz függő. A G megjegyzés az irodalomban az ábrán látható fordítottjaként van definiálva.

Mi a fluorimetria elve?

A fluorimetria elve: Ha a molekulákat megfelelő frekvenciájú fénnyel sugározzuk be, az körülbelül 10-15 másodperc alatt elnyelődik . Az abszorpció során a molekulák a talajról az első gerjesztett szingulett elektronállapotba kerülhetnek.

Melyik detektor a legjobb választás fluorimetriához?

Detektor: - Főleg fotovoltaikus cellát, fotósokszorozó csöveket , fotócsövet használnak detektorként. A fotósokszorozó csövek a legjobbak és pontosak.

Melyik detektort használják a fluorimetriában?

A fluorimetriában fotosokszorozó csövet használnak a kibocsátott fluoreszcencia kimutatására. A fotosokszorozó cső vagy PMT a vákuum fotocső egy típusa. Ez egy rendkívül érzékeny fénydetektor az elektromágneses spektrum ultraibolya, látható és közeli infravörös tartományában.

Mit mér a fluoreszcencia polarizáció?

A fluoreszcens polarizációs (FP) technológia a molekula rotáció mérésén alapul, és széles körben alkalmazzák az oldatban lévő molekuláris kölcsönhatások tanulmányozására. Ez a módszer használható két molekula közötti kötődés és disszociáció mérésére, ha az egyik kötőmolekula viszonylag kicsi és fluoreszkáló.

Mit jelent a polarizált fény?

[ pō′lə-rīzd′ ] n. Fény, amely bizonyos közegeken keresztül visszaverődik vagy áthalad, így minden rezgés egyetlen síkra korlátozódik .

Mi az időfelbontású fluoreszcencia?

A minta fluoreszcenciája a fényimpulzussal történő gerjesztést követő idő függvényében . ... Az egyértelműség kedvéért ezt az eljárást gyakran fluoreszcencia élettartam mérésnek nevezik.

Milyen hőmérsékleten denaturálódik a fehérje?

Az olvadáspont a különböző fehérjéknél eltérő, de a 41 °C (105,8 °F) feletti hőmérséklet sok fehérjében megszakítja a kölcsönhatásokat és denaturálja azokat. Ez a hőmérséklet nem sokkal magasabb, mint a normál testhőmérséklet (37 °C vagy 98,6 °F), tehát ez a tény azt mutatja, milyen veszélyes lehet a magas láz.

Megolvadhat a fehérje?

Ahogy a hőmérséklet tovább emelkedik, a fehérje végül eléri olvadáspontját (Tm) (a stabilitási görbe második pontja, ahol a szabadenergia-változás ΔG egyenlő nullával). ... A fehérjék denaturációja visszafordíthatatlan, míg a fehérjeolvadás reverzibilis .

Milyen hőmérsékleten olvad meg a DNS?

Az olvadási hőmérséklet számos tényezőtől függ, mint például a DNS hosszától [11], [12] (a rövidebb darabok könnyebben megolvadnak, [13]), a nukleotidszekvencia összetételétől [14]–[16], sótól koncentráció (a hozzáadott só ionerőssége) [14]–[15], [17], és általában 50°C és 100°C között van.

A DNS milyen tulajdonságát befolyásolja a hőmérséklet?

Méréseink kimutatták, hogy (1) a hőmérséklet növelése fokozza a DNS flexibilitását , ami hatékonyan a kettős szálú DNS-lánc tömörebb feltekeredéséhez vezet, és (2) a hőmérséklet eltérően befolyásolja a mezofil és termofil szervezetekből származó különböző típusú DNS-hajlító kromatin fehérjéket.

Hogyan számítod ki az olvadáspontot?