Miért szükséges a fluoreszcencia kompenzációja?
Pontszám: 4,2/5 ( 14 szavazat )Ha azonban az emissziós spektrumok átfedik egymást, egynél több fluorokróm fluoreszcenciája is kimutatható. A spektrális átfedés korrigálására fluoreszcencia kompenzációs eljárást alkalmaznak. Ez biztosítja, hogy az adott detektorban észlelt fluoreszcencia a mért fluorokrómból származzon .
Miért van szükségünk kompenzációra az áramlási citometriában?
Az áramlási citometriás kísérlethez a fluoreszcencia fizikája miatt kompenzáció szükséges. A fluorokróm gerjesztett, és fotont bocsát ki különböző hullámhosszúságú tartományban. A fotonok egy része egy második detektorba ömlik, így az egyszeri festett minták kétszeresen pozitívnak tűnnek.
Mi a fő célja a kompenzáló cella használatának?
Az elsődleges cél az , hogy lehetővé tegye a valódi fluoreszcencia mérését az elsődleges csatornában, amelyet a szomszédos fluoroforok átszivárgása szennyezett . Ezért a kompenzáció korrigálja a fluoroforok közötti fluoreszcencia „behatolást”. Azonban nem tökéletes, és nem tudja kijavítani az összes nemkívánatos hatást.
Mi az a kompenzációs mátrix?
A kompenzációs mátrix kiszámítása egyszínű fluoreszcens vezérlőfájlok használatával történik, amelyeket az ImageStream vagy a FlowSight rendszeren gyűjtenek össze, az összes csatornát összegyűjtve, fényes tér megvilágítás vagy SSC hiányában.
Mi az a spektrális kompenzáció?
A spektrális kompenzáció azt jelenti, hogy a nem elsődleges detektorok jeleit továbbra is használják a markerek valódi jelének javítására, ahol lehetséges . Az elsődleges kontrollmintákat a paraméterek elnevezésére használják. ... Az elsődleges detektorokhoz használt minták szintén segítenek elnevezni ezeket a paramétereket a spektrális kompenzáció után.
Áramlási citometriai oktatóanyagok: Minden a kompenzációról
Hogyan ellenőrizhetem a FlowJo kompenzációmat?
1) kattintson duplán a kompenzációs jelvényre a munkaterület ablakában (minden kompenzált mintán ez a jelvény a minta mellett található a munkaterület bal oldali oszlopában.) 2) Kattintson a „Matrix megtekintése…” gombra a fő Kompenzációs ablakban .
Hogyan használja a FlowJo kompenzációt?
1) Ha új kompenzációs mátrixot szeretne létrehozni a FlowJo-ban, válassza ki a kompenzációs csoportot a munkaterületen , és lépjen a Munkaterület szalagra. 2) Kattintson a kompenzáció ikonra az Eszközök lap Citometria sávjában. 3) Elindul a kompenzációs felület.
Hogyan igényelhetek kártérítést a FACS-ban?
- Győződjön meg arról, hogy a citométer a szabványos gyöngyökkel a specifikációkon belül teljesít.
- Állítsa be a fluoreszcens csatornák feszültségét festetlen mintával. ...
- Bizonyos fluorokróm-kombinációkat lehetőség szerint kerülni kell (pl. APC és PE-Cy5), tekintettel a nagymértékű kibocsátási átfedésre.
Hogyan működik a FACS kompenzáció?
A „kompenzáció” kifejezés, ahogyan az áramlási citometrikus elemzésre vonatkozik, a fluoreszcencia átgyűrűzésének korrekciós folyamatára vonatkozik , azaz bármely adott fluorokróm jelének eltávolítására az összes detektorból, kivéve azt, amelyik az adott festék mérésére szolgál.
Mi az a FITC és PE?
A FITC / PE kompenzációs szabványt hardverrel vagy szoftverrel együtt kell használni a fluorokrómok és az áramlási citométer másodlagos fluoreszcencia detektorai közötti spektrális átfedések eltávolítására. ... A FITC/PE kompenzációs szabvány 4 mikrogömbpopuláció keveréke: FITC, PE, FITC/PE és AutoFluor ™.
Hogyan készítsünk kompenzációs gyöngyöket?
- Minden, a kísérletben használt fluorokrómhoz jelöljön meg egy csövet.
- Keverje össze a gyöngyöket legalább 10-szer erőteljesen megfordítva vagy impulzusos vortexeléssel.
- Címkézz fel minden csövet, és impulzusos vortexeld 10-szer.
- Adjon 1 csepp UltraComp eBeads-t minden csőhöz.
- Adjon 1 vagy kevesebb teszt antitest-konjugátumot minden csőhöz, és keverje össze.
Miért használunk áramlási citometriát?
Az áramlási citometria jól bevált módszert biztosít az oldatban lévő sejtek azonosítására, és leggyakrabban perifériás vér, csontvelő és egyéb testnedvek értékelésére használják. Az áramlási citometriás vizsgálatokat az immunsejtek azonosítására és mennyiségi meghatározására, valamint a hematológiai rosszindulatú daganatok jellemzésére használják.
Mik azok a kompenzációs vezérlők az áramlási citometriában?
A megfelelő kompenzációs kontrollok tartalmaznak egy negatív kontrollt (a festetlen sejtek ajánlottak) , és egy-egy sejtet (vagy gyöngyöt), amelyek pozitívan festődnek a kísérletben használt fluorokrómmal . ... Számos gyártó kifejezetten kompenzációs vezérlőként való felhasználásra kínál gyöngyöket.
Mi a különbség a fluorofor és a fluorokróm között?
Főnévként a fluorokróm és a fluorofor közötti különbség az, hogy a fluorokróm a biológiai anyagok megfestésére használt különféle fluoreszcens festékek bármelyike mikroszkópos vizsgálat előtt, míg a fluorofor (biokémia) egy molekula vagy funkciós csoport, amely képes fluoreszcenciára.
A FACS áramlási citometria?
A FACS a fluoreszcenciával aktivált egysejt-válogatás rövidítése , amely egy áramlási citometriai technika, amely tovább növeli a funkcionalitást. ... A sejtek heterogén keverékének különböző populációkba történő fizikai szétválogatására szolgáló technológia számos terápiás és klinikai alkalmazásban hasznos.
Mi az Flow kompenzáció?
A nyomás és a hőmérséklet (PT) kompenzációja átalakítja a térfogati gázáramot meghatározott feltételek mellett egy ekvivalens térfogatárammá alapfeltételek mellett . Általában a sűrűségmérés nem használatos, egy másik megközelítés a molekulatömeg mérése (online/offline), majd kompenzálása a tervezett molekulatömeggel.
Mi az FMO-szabályozás az áramlási citometriában?
A fluoreszcencia mínusz egy (FMO) kontrollok olyan minták, amelyek a panel összes fluoroforjával vannak megfestve, az egyik levonása után. Arra használják, hogy beállítsák a háttérjel felső határát a kihagyott címkén , és így azonosítsák és bemutassák a pozitív populációkat többszínű kísérletekben.
Fizethetek kártérítést a FlowJo-ban?
A FlowJo lehetőséget ad az adatok kompenzálására . Erre olyan esetekben lehet szükség, amikor a mintavétel során a kompenzációt nem megfelelően határozták meg (bár ha a mintát túlkompenzálták, akkor nincs jogorvoslat).
Beállíthatja a kompenzációt a FlowJo-ban?
A FlowJo nem teszi lehetővé az adatgyűjtési mátrix közvetlen szerkesztését az FCS szabvány integritásának megőrzése érdekében, mivel ezek a kompenzációs értékek a fájlban vannak tárolva. Ezért a FlowJo-ban létre kell hozni egy szerkeszthető másolatot .
Hogyan igényelhetem a Cytoflexet?
Gyors tipp: Ha visszamenőlegesen szeretné alkalmazni a kompenzációt (először egy kísérlettel kezdje, majd alkalmazza a kompenzációt), nyissa meg a kísérletet, és futtassa a mintákat . Kattintson a jobb gombbal a mintára, megjelenik egy mező az „Apply Compensation”.
Hogyan működik a FlowJo?
A Grafikonablak bal felső sarkában egy menü látható az ikonok vízszintes listájával. Kattintson a téglalap eszközre, és mozgassa az egeret a grafikon megjelenítésére. Kattintson és húzza az egeret egy téglalap létrehozásához. Megjegyzés: a kapu beállítása után megjelenik egy menü, amelyben meg kell nevezni a kaput.
Hogyan törölhetek egy kompenzációs mátrixot a FlowJo-ban?
jo" utótag, és kattintson rá duplán, miközben a FlowJo fut. Figyelje meg az "1" terület közelében, hogy a kompenzációs mátrixok listája található. Kattintson egy kompenzációs mátrixra, majd kattintson a "-" gombra az eltávolításához .
Az áramlási citometria kimutathatja az elhalt sejteket?
A membrán integritásának elvesztése az áramlási citometriás vizsgálatok során a sejthalál egyértelmű mutatója. Az elhalt sejtfestéket kizáró sejteket életképesnek tekintik, míg a sérült membránnal rendelkező sejtek lehetővé teszik, hogy a sejt belsejében lévő festék megfestje a belső komponenst, így a sejt elhaltként azonosítható.