Inaktiváljam az fbs-t a fűtéssel?
Pontszám: 4,4/5 ( 54 szavazat )Az elmúlt években a Coriell az összes hővel inaktivált szérumot felhasználta sejttenyészeteihez, hogy inaktiválja az újszülött borjúszérumban található komplementfehérjét. Mióta áttértünk a magzati szarvasmarha-szérumra, azt találtuk, hogy a legtöbb sejtvonal esetében nincs szükség hőinaktiválásra.
Meddig melegíted, inaktiválod az FBS-t?
A következő protokoll javasolt a borjúmagzati szérum (FBS) hőinaktiválására. Az FBS-t 56±2 °C-ra melegítjük 30±2 percig keverő vízfürdőben. Hőinaktiválás (HI) – olyan folyamat, amelynek során az FBS-t 56±2°-os hőmérsékleten tartják 30±2 percig.
Miért szükséges az FBS hőinaktiválása használat előtt?
Az FBS gyakori kezelése a hőinaktiválás, amikor az FBS-t 30 percig 56 °C-ra melegítik vízfürdőben, alkalmankénti rázatással. A cél a komplementrendszer bármely komponensének inaktiválása, amelyek az FBS-ben jelen vannak [24], és a sejtnövekedés egyéb lehetséges ismeretlen gátlóit.
Miért kell hővel inaktiválni a szérumot?
A hőinaktiválás célja a komplement aktivitás elpusztítása a szérumban anélkül, hogy befolyásolná a termék növekedést elősegítő tulajdonságait . A komplementaktivitás eltávolítása a szérumból nem szükséges a legtöbb sejttenyészetben, de szükséges lehet a komplementaktivitásra érzékeny tenyészetek esetében.
Hogyan tárolja a hővel inaktivált FBS-t?
Védje a felolvasztott FBS-t és más szérumokat biztonságos hűtéssel és tárolással. A felolvasztott szérumot azonnal használja. A folyékony FBS és más szérum hűtve (2-8 °C) legfeljebb négy hétig tárolható.
A szérum alikvot része és előkészítése használat előtt
Túl lehet melegíteni az FBS-t?
2 óra 56 °C-on elpusztíthatja az FBS fehérjéit, amelyek a sejtnövekedés támogatásához szükségesek (főzve vannak). Fél óra 56 °C-on elegendő. ... Bizonyos sejtek esetében a 30 percnél hosszabb hőinaktiválás 56 °C-on káros hatással lehet a sejtekre.
Az FBS lefagyasztható?
A magzati szarvasmarha-szérumot soha nem szabad fagymentes fagyasztóban tárolni , mivel az ilyen típusú fagyasztók többször is átesnek olyan leolvasztási ciklusokon, amelyek során a szérum fagyásnak és felengedésnek van kitéve. 1. Vegye ki a szérumot a fagyasztott tárolóból, és szobahőmérséklettől 37 °C-ig terjedő hőmérsékletű vízfürdőben olvassa fel.
Mik a szérum hátrányai?
Leírják a szérum hátrányait, beleértve a változékonyságot, az eltarthatóságot, a rendelkezésre állást, a későbbi feldolgozásra gyakorolt hatást és a szennyeződés lehetőségét .
Miért melegszik a szérum?
A felnőtt szérum különféle immunfaktorokat tartalmaz, különösen szérumkomplementet, amelyek bizonyos körülmények között gátolhatják vagy elpusztíthatják a sejteket. A melegítő szérum célja a szérumkomplement inaktiválása . ... A hőinaktiválás növeli a csapadékképződést és ennek következtében a szérum zavarosodását.
Mi történik, ha a szérumot felmelegítik?
A szérum hővel inaktiválása: Sok sejttenyésztő termék hővel inaktivált szérumot használ a komplement elpusztítására, amely az antitestek megkötése révén sejtlízishez vezethet. Lassan olvasszuk fel a szérumot (lásd fent).
Hogyan semlegesíti az FBS a tripszint?
Az FBS proteáz inhibitorokat, különösen α1-antitripszint tartalmaz, amelyek gátolják a tripszin aktivitását. Még a tripszin hozzáadása előtt is meg kell mosni a sejteket PBS -sel, hogy eltávolítsuk a maradék FBS-t, mert ez akadályozhatja a tripszinezési folyamatot.
Miért adjuk hozzá az FBS-t a médiához?
A szérumot általában a bazális táptalaj kiegészítéseként használják sejttenyészetekben. A szérum leggyakoribb típusa a magzati szarvasmarha szérum (FBS) , mivel magas az embrionális növekedést serkentő faktor tartalma . ... A szérum emellett pufferkapacitást ad a táptalajhoz, és megköti vagy semlegesíti a mérgező összetevőket.
Szűrni kell az FBS-t?
Nem szükséges , mivel a kereskedelmi FBS általában steril - Ezt az információt a csomagban láthatja. Néhányuk azonban nem hőinaktivált, ezért inaktiválást kell végezni a sejttenyészetben való felhasználás előtt (57ºC 30 percig vízfürdőben).
Hogyan inaktiválja a hő a vírust?
A hőkezelés egy széles körben alkalmazott dekontaminációs módszer, elsősorban vírusok esetén alkalmazzák [ 10 ]. Úgy gondolják, hogy főként a fehérjék és más molekulák másodlagos szerkezetének denaturálásával inaktiválja a vírusokat, ami károsítja a molekulafunkciókat [ 11 ].
Hogyan kaphatok inaktív FBS-t?
- Hagyja a szérumot szobahőmérsékleten akklimatizálódni legalább 10 percig, vagy hűtse le egy éjszakán át 2°C és 8°C közötti hőmérsékleten.
- Ezután a szérum szobahőmérsékleten teljesen felolvasztható.
Hogyan lehet hővel inaktiválni az FBS Sigmát?
56°C-on 30 percig történő melegítéssel készült . 56°C-on 30 percig történő melegítéssel készült. A szérumot 30 percig 56 °C-ra hevítik a komplementrendszer inaktiválására az immunológiai vizsgálatokhoz. A hőaktiválás a sejtnövekedés más, meghatározatlan inhibitorait is inaktiválja a tenyészetben.
Hogyan lehet hővel inaktiválni az emberi szérumot?
A humán AB szérum hővel inaktiválható 56°C-on 30 percig történő melegítéssel, hogy a szérum különböző komponenseit, például komplement faktorokat inaktiválják.
Hogyan lehet hővel inaktiválni az FBS Gibco-t?
Hogyan tudom hővel inaktiválni a szérumot? Melegítse 56°C-ra vízfürdőben 30 percig, és 10 percenként forgassa meg az üveget . A pontosság érdekében használjon egy másik, hasonló méretű palackot kontrollként, és adjon hozzá megfelelő mennyiségű vizet a kontrollpalackhoz.
Mi az a szérumkomplement?
A szérumkomplement rendszer olyan oldott fehérjék sorozata, amelyek különféle kórokozók ellen védenek . A komplement aktivitása a szérumban a vörösvérsejtek in vitro lízisére való képessége alapján határozható meg.
Használhatok DMEM-et EMEM helyett?
Ezenkívül a DMEM négyszer több vitamint és aminosavat tartalmaz, mint az EMEM. Hasonlóképpen, kétszer vagy négyszer több glükózt tartalmaz, mint az EMEM. ... Így a DMEM alkalmasabb bizonyos sejttípusokhoz. Mivel azonban a DMEM alap táptalaj, nem tartalmaz fehérjéket vagy növekedésserkentő szereket.
Mik a szérummentes táptalaj előnyei és hátrányai?
- Megnövelt definíció és reprodukálhatóbb megfogalmazások, amelyek meggyőzőbb és következetesebb kutatási eredményeket tesznek lehetővé.
- Könnyebb tisztítás és feldolgozás.
- Alacsonyabb a baktériumokkal, gombákkal vagy vírusokkal való fertőzés kockázata.
Mit jelent a Xeno free?
"Xeno-Free" termékeink nem xenogén és állati szérummentesek . azaz nem tartalmaznak emberi eredetű anyagoktól eltérő fajokból származó anyagot. A „xenogénnek” nevezett anyagok egy másik fajból származnak, ezért genetikailag vagy immunológiailag nem kompatibilisek.
Meddig áll el az FBS a fagyasztóban?
C, egy hónapig stabil.
Mennyi ideig tárolható az FBS szobahőmérsékleten?
A táptalajt élettanilag megfelelő hőmérsékleten (37 °C) kell tudnia tárolni 9 napig . Egyetlen kísérletem sem futott 9 napnál hosszabb ideig ugyanazzal a közeggel.
Miért fagyasztják le a szérumot, és miért nem tárolják hűtőszekrényben?
Kerülni kell a többszöri felengedési/fagyasztási ciklusokat, mivel ezek felgyorsítják a szérumtápanyagok lebomlását, és oldhatatlan csapadék képződését idézhetik elő . Emiatt a szérumot soha nem szabad „fagymentes” fagyasztóban tárolni.