Hogyan működik a puromicin?
Pontszám: 4,1/5 ( 64 szavazat )A puromicin egy aminonukleozid antibiotikum, amelyet a Streptomyces alboniger baktérium termel. Gátolja a fehérjeszintézist azáltal, hogy megzavarja a peptidtranszfert a riboszómákon, ami a transzláció során idő előtti láncvégződést okoz . Prokarióta és eukarióta sejtekben egyaránt erős transzlációs inhibitor.
Mi a puromicin hatásmechanizmusa?
A puromicin egy természetben előforduló aminonukleozid antibiotikum, amely gátolja a fehérjeszintézist azáltal, hogy riboszóma által katalizált beépül a megnyúló születő láncok C-terminálisába, blokkolja a további kiterjesztést és a transzláció idő előtti leállását eredményezi .
Hogyan pusztítja el a puromicin a sejteket?
VÁLASZ: A puromicin egy aminonukleozid antibiotikum, amely a Streptomyces alboniger baktériumból származik, és a riboszómában végbemenő transzláció során idő előtti láncvégződést okoz. A molekula egy része az aminoacilezett tRNS 3' végére hasonlít.
A puromicin megöli az emberi sejteket?
A sejttenyészetekben szelekciós szerként javasolt dózis 1-10 μg/ml tartományban van, bár már 1 μg/ml koncentrációban is mérgező lehet az eukarióta sejtekre. A puromicin gyorsan hat, és 2 napon belül képes elpusztítani a nem rezisztens sejtek akár 99%-át is .
Milyen betegségek esetén alkalmazható a puromicin?
A puromicin egy antibiotikum, amely megakadályozza a bakteriális fehérjék transzlációját . Laboratóriumi sejttenyészetekben szelektív szerként használják. A puromicin mind a prokarióta, mind az eukarióta sejtekre toxikus, megfelelő dózisok mellett jelentős sejthalált eredményez.
Puromicin használata a fehérjeszintézis mérésére
Mennyi ideig tart a media puromicin?
Javaslatok: 1) Ha hozzá kell adnia a puromicint a médiához, hagyja a médiát szobahőmérsékleten, hogy felmelegedjen a 4 C-os tárolóhelyről a vízfürdő használata helyett. Ez körülbelül 3 hétig stabilan tartja.
Milyen típusú antibiotikum a puromicin?
A puromicin egy aminonukleozid antibiotikum , amelyet a Streptomyces alboniger termel. Kifejezetten gátolja a peptidil transzfert mind a prokarióta, mind az eukarióta riboszómákon. Ez az antibiotikum gátolja a Gram-pozitív baktériumok és különféle állati és rovarsejtek növekedését.
Milyen gyorsan pusztítja el a sejteket a puromicin?
A puromicin titrálása Az optimális hatékonyságot 1-4 napon belül kell elérni. A minimálisan alkalmazandó antibiotikum koncentráció az a legalacsonyabb koncentráció, amely a sejtek 100%-át elpusztítja a puromicin szelekció kezdetétől számított 3-5 napon belül.
Mennyi puromicint vegyek a kiválasztáshoz?
A puromicin antibiotikum biztosítja a puromicin-N-acetil-transzferáz (pac) gént expresszáló sejtek hatékony pozitív szelekcióját. Emlőssejtekben a puromicin javasolt munkakoncentráció-tartománya 0,5-10 µg/ml.
Hogyan kezeljük a sejteket puromicinnel?
A legutóbbi módszerünk az volt, hogy a sejteket normál eljárással transzfektáltuk, majd 24 órával később puromicinnel kezeltük. Először meg kell készítenie a Puromycin ölési görbét a sejtjein , hogy ellenőrizze, milyen koncentrációjú puromicin pusztítja el a nem transzfektált sejtek 100%-át. Általában 1-10 ug/ml között működik.
Mibe hígítod a puromicint?
1 mg/ml-es puromicin törzsoldatot használva készítsen öt hígítást 2x végső koncentrációban, az 1. táblázat C és D oszlopában látható módon hígítva a törzsoldatot. (Ha a 2x antibiotikum-koncentrációt azonos térfogatú sejtszuszpenzióval hígítjuk, az 1. táblázat B oszlopában látható végső koncentrációt eredményezi.
Hogyan készítsd a puromicin állományt?
Ez a termék 50 mg/ml vízben oldódik. A törzsoldatot 0,22 μm-es szűrővel történő szűréssel kell elkészíteni, majd alikvot részekben -20 °C-on tárolni. Ez a termék 10 mg/ml koncentrációban metanolban is oldódik.
Milyen betegségek esetén alkalmazható az Anisomycin?
Az anizomicint széles körben használták a fehérjeszintézis gátlójaként a tanulással és a memóriával, valamint a szinaptikus plaszticitással kapcsolatos vizsgálatokban . Működési módja azonban bonyolult. A transzláció gátlásán kívül ez a gyógyszer más hatásokat is mutat, leginkább a mitogén által aktivált protein kinázokon.
Mi a G418 kiválasztása?
A Gibco® Geneticin® szelektív antibiotikumot (G418 szulfát) szelektív antibiotikumként használják baktériumok esetében 100-200 µg/ml, a legtöbb emlős sejt esetében 200-500 µg/ml koncentrációban. Ezt a terméket 50 mg/ml-es vizes oldat formájában szállítjuk. Különféle sejtkultúrás antibiotikumokat kínálunk az Ön kényelme érdekében.
Hogyan működik az mRNS megjelenítése?
Az mRNS-megjelenítés egy olyan megjelenítési technika, amelyet in vitro fehérjék és/vagy peptidek evolúciójára használnak olyan molekulák létrehozására, amelyek képesek kötődni a kívánt célponthoz . ... A jól kötődő mRNS-fehérje fúziók ezután reverz transzkripcióra kerülnek cDNS-vé, és szekvenciájukat polimeráz láncreakcióval amplifikálják.
Mikor kezdjem el a puromicin kiválasztását?
A szelekció (puromicin hozzáadása a sejttenyésztő tápközeghez) általában a transzfekciót követő 24 órával kezdődik. A szelekciót a transzfektált sejtek állapotától függően 48 órával is elindíthatja.
Hogyan tárolja a puromicint?
Tárolás és stabilitás: A Puromycint szobahőmérsékleten szállítják. Átvételkor 4°C vagy -20°C hőmérsékleten kell tárolni. A puromicin két évig stabil -20 °C-on, két évig 4 °C-on és 3 hónapig szobahőmérsékleten. Kerülje az ismételt fagyasztási-olvadási ciklusokat.
A puromicin vízben oldódik?
A termék vízben (50 mg/ml) oldódik, így tiszta, színtelen vagy halványsárga oldatot kapunk. A törzsoldatot át lehet engedni egy 0,22 µm-es szűrőn, és aliquot részekben –20 °C-on tárolni. Metanolban (10 mg/ml) is oldódik.
A puromicin fényérzékeny?
A puromicin-dihidroklorid fényérzékeny a legtöbb alapközeg, például a DMEM és az RPMI 1640 fényérzékenységével. Javasoljuk, hogy a termék fénynek való kitettségét a lehető legnagyobb mértékben korlátozza (pl.
Hogyan transzfektálja a lentivírus a sejteket?
- Olvassza fel a lentivírust jégen. Keverjen össze 8 µl Polybrene-t (1 mg/ml aliquot) 957 µl tenyészettel. ...
- Másnap cserélje ki a Lentivirus/Polybrene keveréket friss táptalajra. Inkubálja a sejteket standard sejttenyésztési körülmények között. ...
- koncentráció 0,1-10 μg/ml között mozog. Cserélje ki a táptalajt 48-72 óra múlva.
Hogyan készítsünk stabil sejtvonalat?
- Hozzon létre egy ölési görbét az optimális szelekciós antibiotikum-koncentráció meghatározásához.
- Sejt transzfektálása a kívánt plazmidkonstrukció(k)kal
- Válassza ki és bővítse ki a stabil poliklonális kolóniákat.
- Azonosítson egyedi klónokat korlátozott hígítással és kiterjesztéssel.
Melyik antibiotikum gátolja a transzlációt prokariótákban és eukariótákban egyaránt?
Antibiotikumok, amelyek blokkolják a fordítást. A puromicin mind a prokarióta, mind az eukarióta sejtekre hat. Szerkezete hasonló a tirozin vagy fenilalanin aminoacil-tRNS hordozójának 3'-végéhez.