Miért használjunk ammónium-formiátot a mozgófázishoz?
Pontszám: 4,3/5 ( 8 szavazat )Egy alternatív mozgófázis-módosító a FA és az ammónium-formiát (AF) kombinációja, amelyről kimutatták , hogy javítja a peptidek elválasztását . ... Összességében az FA/AF használata javította az online RP-LC elválasztást, és a peptidek azonosításának jelentős növekedéséhez vezetett a jobb fehérjeszekvencia lefedettség mellett.
Mire használható az ammónium-formiát?
Az ammónium-formiátot széles körben használják különféle szerves reakciókban, például a Leuckart-reakcióban , amely aldehidek és ketonok reduktív aminálását foglalja magában. Pufferként szolgál a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiában (HPLC) és a folyadékkromatográfiás tömegspektrometriában (LC/MS).
Miért használnak savat mobilfázisban?
Mivel az ionizálható vegyületek visszatartása nagyon érzékeny a mozgófázis pH-jára, szükséges a mozgófázis pH-jának szabályozása puffer hozzáadásával . A puffer fenntartja a pH-értéket kis mennyiségű sav vagy bázis hozzáadásakor. A HPLC-ben sok különböző anyagot használtak pufferelésre.
Milyen oldószerek használhatók mozgófázisként LC-MS MS-hez?
Az LC-MS-ben használt tipikus mozgófázis-módosítók közé tartoznak az ammónium-formiát és ammónium-acetát pufferek, valamint a hangya-, ecet- és trifluor-ecetsav .
Miért használnak puffert a mobil fázisban?
Mivel az ionizálható vegyületek visszatartása nagyon érzékeny a mozgófázis pH-jára, szükséges a mozgófázis pH-jának szabályozása puffer hozzáadásával. A puffer fenntartja a pH-értéket kis mennyiségű sav vagy bázis hozzáadásakor. ... Számos puffer kellően illékony ahhoz, hogy alkalmas legyen LC-MS használatra.
Ammónium-formiát készítése
Hogyan használják a puffereket a való életben?
A szervezet pufferoldatot használ az állandó pH fenntartására . Például a vér karbonát/bikarbonát puffert tartalmaz, amely a pH-t 7,4 közelében tartja. Az enzimaktivitás a pH-tól függ, ezért az enzimvizsgálat során a pH-nak állandónak kell maradnia. Samponokban.
Miért használunk puffereket?
A puffer olyan oldat, amely ellenáll a pH változásának savas vagy bázikus komponensek hozzáadásával . Kis mennyiségű hozzáadott savat vagy bázist képes semlegesíteni, így viszonylag stabilan tartja az oldat pH-ját. Ez fontos olyan eljárások és/vagy reakciók esetében, amelyek specifikus és stabil pH-tartományt igényelnek.
Hogyan növelhetem az LC-MS érzékenységét?
Az érzékenység javításának legegyszerűbb és leghatékonyabb módja az ionizációs forrás feltételeinek optimalizálása, hogy biztosítsák a gázfázisú ionok maximális termelését és átvitelét az MS rendszerbe.
Mi az LC-MS analízis?
A folyadékkromatográfia tandem tömegspektrometriával (LC-MS-MS) egy erőteljes analitikai technika, amely egyesíti a folyadékkromatográfia elválasztó képességét a háromszoros kvadrupólus tömegspektrometria rendkívül érzékeny és szelektív tömegelemző képességével.
Mi az LC-MS elve?
Az LC-MS technológia magában foglalja a HPLC alkalmazását, ahol a keverékben lévő egyes komponenseket először szétválasztják, majd ionizálják, majd szétválasztják az ionokat tömeg/töltés arányuk alapján .
Miért használják a TFA-t a HPLC-ben?
A TFA-t széles körben használják mozgófázis-adalékanyagként biológiai molekulák, például fehérjék és peptidek HPLC-s elválasztásában, mivel ionpárosító reagensként működik, és gyorsan egyensúlyba kerül, így gradiens elúcióval is használható.
Miért használnak savat a HPLC-ben?
A B oldószer általában HPLC minőségű szerves oldószer, például acetonitril vagy 0,1%-os savtartalmú metanol. A savat a kromatográfiás csúcs alakjának javítására és protonforrás biztosítására használják fordított fázisú LC/MS-ben .
Miért fontos a mobil fázis?
A mobil fázist joggal nevezték a HPLC rendszer mentőövének. Fontos szerepe van a mintának az elválasztó oszlopon keresztül történő szállításában, majd ezt követően a detektorhoz való eljuttatásában a szétválasztott komponensek azonosítása céljából.
Mérgező az ammónium-formiát?
Az ammónium-formiát/hangyasav és a nátrium-formiát/hangyasav termékek maró hatásúak . ... A hangyasav és ammónium-, kalcium- és nátriumsói takarmányozásban történő felhasználása környezetbarát.
Hogyan keletkezik az ammónium-formiát?
A tiszta ammónium- formiát hevítés hatására formamidra és vízre bomlik , és ez az elsődleges felhasználási területe az iparban. Hangyasav ammónium-formiát híg savval történő reagáltatásával is előállítható, és mivel hangyasavból is előállítják az ammónium-formiátot, a hangyasav tárolására szolgálhat.
Illékony az ammónium-formiát?
Az ammónium-formiát illékony puffer , és nagyon jól alkalmazható LC-MS módszerekhez. Általában nem szennyezi az ionforrást és a kvadrupolt. ... Vállalkozásomban az ionforrás szennyeződésének tipikus forrása, és a nagy vákuumú részek, mint a pajzs, a kapilláris, a skimmer és a kvadrupol a mintából származó nem illékony vegyületek.
Mi az LC technika?
A folyadékkromatográfia (LC) egy olyan technika, amelyet széles körben alkalmaznak a vegyületek mintából az elemzés előtt történő elválasztására, és gyakran tömegspektrometriához kapcsolják.
Mi a különbség a HPLC és az LC-MS között?
A különbség a hagyományos LC és a HPLC között az, hogy az LC-ben az oldószer a gravitációs erő hatására halad . A HPLC alkalmazásakor az oldószer nagy nyomás alatt halad, amelyet egy szivattyú segítségével állítanak elő, hogy legyőzze a töltött oszlopban a nyomásesést, ami csökkenti az elválasztás idejét.
Mennyi ideig tart az LC-MS?
Gyakrabban az analitoknak valamivel hosszabb kromatográfiás időre van szükségük az optimális elválasztáshoz. Ez azonban még az LC-MS/MS szabványok szerint is hosszú, 10-12 perces kromatográfiás futási idő mellett is ahhoz vezet, hogy 2,5-3 percenként más mintát visznek be a rendszerbe.
Mi a tömegspektrum érzékenység?
A tömegspektrometria egy érzékeny technika, amelyet molekulák detektálására, azonosítására és mennyiségi meghatározására használnak tömeg/töltés (m/z) arányuk alapján . ... A jelenlegi tömegspektrométerek érzékenysége lehetővé teszi az analitok kimutatását az attomoláris tartományba eső koncentrációkban ( 10-18 ).
Hogyan növelhetem a HPLC-m érzékenységét?
Javíthatja a hplc érzékenységét tömegspektrométer detektorként és lehetőleg lc-ms.ms tandem tömegspektrometria használatával. Használhat 2,7-1,7 mikrométer közötti átmérőjű, kis szilícium-dioxid szemcseméretű kolóniumokat is.
Az alulról felfelé irányuló proteomika melyik lépésében történik a tömegspektrometria?
Az alulról felfelé irányuló proteomika magában foglalja a fehérjék proteolitikus emésztését a tömegspektrometriás elemzés előtt . Az alulról felfelé irányuló kifejezés azt jelenti, hogy az alkotó fehérjékre vonatkozó információkat egyedileg azonosított fragmens peptidekből állítják helyre.
Hol használják a puffereket?
Arra használják , hogy megakadályozzák az oldat pH-értékének változását , függetlenül az oldott anyagtól. A pufferoldatokat a pH közel állandó értéken tartásának eszközeként használják számos kémiai alkalmazásban. Például az emberi szervezetben lévő vér pufferoldat.
Hogyan készülnek az alappufferek?
A bázikus puffert úgy állítják elő, hogy egy gyenge bázist összekevernek konjugált sójával erős savval együtt . ... A konjugált só képződésekor az erős bázis NaOH-dal reagál, nátrium-acetátot, azaz egy erős bázis sóját képezve. Ezért használható pufferoldat készítésére.
Mi az a pufferoldat, mondj egy példát?
A pufferoldat (pontosabban pH-puffer vagy hidrogénion-puffer) olyan vizes oldat, amely gyenge sav és konjugált bázis keverékéből áll, vagy fordítva. ... Például a bikarbonát pufferrendszert a vér pH-jának szabályozására használják, és a bikarbonát pufferként is működik az óceánban.