Miért használják a torma-peroxidázt az elisa-ban?
Pontszám: 4,9/5 ( 30 szavazat )A HRP-t az immunhisztokémiában és az ELISA-ban használják, mert színes vegyületeket hoz létre . Egy antigén vagy fehérje molekula kimutatására a HRP szubsztrátokat úgy tervezték meg, hogy oxidációkor kemilumineszcens, kromogén vagy fluoreszcens jelet generáljanak.
Mi a torma-peroxidáz funkciója az ELISA-ban?
Az ELISA-ban az egyik gyakran használt enzimkonjugátum a torma-peroxidáz. A torma-peroxidáz (HRP) egy 40 000 daltonos fehérje, amely a hidrogén-peroxid (H 2 O 2 ) vízzé (H 2 O) redukcióját katalizálja [1].
Mi az a torma-peroxidáz, miért használják?
A torma-peroxidáz (HRP) egy enzim, amelyet a fotometriás vizsgálatokban jelek erősítésére használnak kromogén vagy kemilumineszcens szubsztrátok konverziójának katalizálásával célpontok, például fehérjék, szénhidrátok és nukleinsavak kimutatására .
Hogyan működik a torma-peroxidáz?
A torma-peroxidáz (HRP) katalizálja a szubsztrátok hidrogén-peroxid általi oxidációját , ami színes vagy fluoreszkáló terméket eredményez, és a reakció melléktermékeként fény szabadul fel. A HRP optimálisan működik közel semleges pH-n, és cianidokkal, szulfidokkal és azidokkal gátolható.
Miért használnak szubsztrátot az ELISA-ban?
A szubsztrát kulcsfontosságú összetevője a sikeres ELISA vizsgálatnak. Az optimális érzékelés érdekében a hordozónak nagyon érzékenynek kell lennie . A kolorimetriás ELISA enzim-szubsztrát reakciók olyan oldható termékeket hoznak létre, amelyek abszorbanciája (optikai sűrűsége) spektrofotométerrel mérhető.
Torma-peroxidáz (HRP)
Mi az ELISA protokoll 4 lépése?
A Közvetlen ELISA eljárás 4 lépésben foglalható össze: Lemezbevonat, Lemezblokkolás, Antitest-inkubálás és Detektálás .
Mi az ELISA négy típusa?
Az ELISA-nak négy fő típusa van: közvetlen ELISA, indirekt ELISA, szendvics ELISA és kompetitív ELISA . Mindegyiknek egyedi előnyei, hátrányai és alkalmassága van.
Miért használják a torma-peroxidáz enzimet ebben az immunvizsgálatban?
A HRP-t gyakran használják konjugátumokban (genetikailag vagy kémiailag összekapcsolt molekulákban) a molekuláris célpont jelenlétének meghatározására . ... Itt az antitest biztosítja a specifitást a kérdéses fehérje lokalizálásához, a HRP enzim pedig szubsztrát jelenlétében kimutatható jelet állít elő.
Miért válik kékre a TMB?
A TMB kék színűvé válik H2O2 és peroxidáz jelenlétében . Néha a fémek peroxidáz utánzóként is működnek. Csak kerülje a peroxidot és a peroxidázt a közelben. Érdemes megfontolni egy friss alaplé elkészítését.
Hogyan készüljek fel a HRP-re?
0,0017 M hidrogén-peroxid készítése • Adjon 1 ml 30%-os hidrogén-peroxidot 100 ml molekuláris biológiai tisztaságú vízhez. Hígítson tovább 1 ml oldatot 50 ml-re 0,2 M kálium-foszfát pufferrel. 0,0025 M 4-aminoantipirin készítése • Oldjunk fel 810 mg fenolt 40 ml molekuláris biológiai tisztaságú vízben.
Mi a peroxidáz jelentése?
: különböző anyagok peroxidok általi oxidációját katalizáló enzim .
Melyik enzimet használják az ELISA technikában?
A leggyakrabban használt enzimjelölések a torma-peroxidáz (HRP) és az alkalikus foszfatáz (AP) . Más enzimeket is használtak; ezek közé tartozik a β-galaktozidáz, az acetilkolinészteráz és a kataláz. A HRP vagy AP konjugátummal végzett ELISA végrehajtásához szubsztrátok nagy választéka kapható a kereskedelemben.
Mit csinál a TMB az ELISA-ban?
Alkalmazás. A TMB szubsztrátot ELISA eljárásokban használják, amelyek torma-peroxidáz konjugátumokat használnak. A TMB szubsztrát oldható kék reakcióterméket fejleszt, amely 370 vagy 655 nm-en 370 vagy 655 nm-en olvasható le .
Hogyan lehet felismerni a HRP-t?
Kemilumineszcenciás detektálás A DNS- és RNS-próbák egy egyszerű jelölési reakcióval jelölhetők HRP-vel. A jelölt próba további tisztítás nélkül felhasználható. A szonda a bloton a HRP és a luminol közötti fénygeneráló reakcióval detektálható.
A torma-peroxidáz fényérzékeny?
Hosszú eltarthatóság: a torma-peroxidáz és az alkalikus foszfatáz enzim megfelelő tárolás mellett viszonylag stabil. Mivel ezek az enzimek fényérzékenyek , a kemilumineszcencia során keletkező fény nem befolyásolja őket.
Hogyan járul hozzá a torma-peroxidáz HRP a végső színes minta létrehozásához?
Kérdés: Hogyan járul hozzá a torma-peroxidáz (HRP) a végső színes minta létrehozásához? A. A HRP egy olyan fehérje, amely elszíneződik, amikor az epitópjához kapcsolódó antitesthez kötődik . ... A HRP egy enzim, amely katalizálja a szubsztrát átalakulását színes termékké.
Hogyan működik a DAB folt?
A DAB-festés során a DAB-t hidrogén-peroxid oxidálja egy olyan reakcióban, amelyet jellemzően a torma-peroxidáz (HRP) katalizál . Az oxidált DAB barna csapadékot képez a HRP helyén, amely fénymikroszkóppal láthatóvá válik.
Miért használnak másodlagos antitestet az ELISA-ban?
A másodlagos antitestek használatának előnyei A másodlagos antitesteket olyan célpont indirekt kimutatására használják, amelyhez egy specifikus elsődleges antitest először kötődik . A másodlagos antitestnek specifitással kell rendelkeznie mind az antitestfajtákra, mind az alkalmazott elsődleges antitest izotípusára vonatkozóan.
Mi a peroxidáz enzim szubsztrátja?
Ezen enzimek közül sok számára az optimális szubsztrát a hidrogén-peroxid , de mások aktívabbak a szerves hidroperoxidokkal, például a lipid-peroxidokkal. A peroxidázok aktív helyükön hem kofaktort, vagy felváltva redox-aktív ciszteint vagy szelenociszteint tartalmazhatnak.
Mi a specifikus hordozó a HRP-hez, milyen színt produkál?
HRP (torma-peroxidáz). A szubsztrát ABTS (2,2'-azino-bisz(3-etilbenzotiazolin-6-szulfonsav), amely SÁRGA színt ad. A sárga színt szemmel vagy spektrométerrel mérik 414 nanométeren.
Melyik ELISA a legjobb?
Ha egy analit kimutatására vagy mennyiségi meghatározására van szükség, akkor szendvics vagy kompetitív ELISA is használható. Ha azonban immunológiai választ kell mérnie, akkor a direkt vagy indirekt ELISA a legmegfelelőbb az Ön igényeinek.
Az ELISA bioszenzor?
Ebben a tanulmányban egy élelmiszer eredetű kórokozó, a Vibrio parahaemolyticus gyors kimutatási rendszerét építettük ki enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálati (ELISA)-on-a-chip (EOC) bioszenzor technológiával, hogy minimalizáljuk a mikroorganizmus fertőzés kockázatát. ... Így az IMS-EOC módszer lehetővé tette a V gyors kimutatását.