Mi az a multiplex pcr?
Pontszám: 4,7/5 ( 61 szavazat )A multiplex polimeráz láncreakció arra utal, hogy a polimeráz láncreakciót több különböző DNS szekvencia egyidejű amplifikálására használják. Ez az eljárás több primert és egy hőmérséklet-közvetített DNS-polimerázt hőciklusban amplifikálja a mintákban.
Mire a multiplex PCR teszt?
Multiplex PCR 2008-ban a multiplex-PCR-t mikroszatelliták és SNP-k (Single Nucleotide Polymorphism) elemzésére használták. Több primer-készletből áll egyetlen PCR-keveréken belül, hogy különböző méretű, különböző DNS-szekvenciákra specifikus amplikonokat hozzon létre.
Mi a multiplex PCR elve?
A multiplex PCR alapelve megegyezik a hagyományos PCR-éval, azzal az eltéréssel, hogy egynél több primerpárra van szükség ugyanabban a reakcióban . A primerek specifikusan kombinálódhatnak a megfelelő DNS-templátukkal, és egynél több DNS-fragmens amplifikálódik egy reakcióban egyidejűleg.
Miben különbözik a multiplex PCR a standard PCR-től?
A hagyományos singleplex PCR során egyetlen célpontot amplifikálnak egyetlen reakciócsőben. Ezzel szemben a multiplex PCR lehetővé teszi több célszekvencia egyidejű amplifikációját egyetlen csőben, specifikus primerkészletek és spektrálisan eltérő fluoroforokkal jelölt próbákkal kombinálva .
Mi a legfontosabb tényező a multiplex PCR-ben?
Egy sikeres multiplex PCR vizsgálathoz különösen fontosak a primerek relatív koncentrációi a különböző lókuszokban , a PCR-puffer koncentrációja, a ciklusos hőmérsékletek, valamint a magnézium-klorid és dezoxinukleotid koncentrációk közötti egyensúly.
Multiplex PCR
Hányféle PCR létezik?
Nagy hatótávolságú PCR – polimerázok keverékének felhasználásával hosszabb DNS-tartományok jönnek létre. Assembly PCR – a hosszabb DNS-fragmenseket átfedő primerek segítségével aplifikálják. Aszimmetrikus PCR – a cél DNS-nek csak egy szála amplifikálódik. In situ PCR – PCR, amely sejtekben vagy tárgylemezen rögzített szövetben történik.
Mik a multiplex PCR előnyei?
A Multiplex PCR előnyei Több információ kevesebb mintával . Nagyobb áteresztőképesség . Költséghatékony – kevesebb dNTP, enzim és egyéb fogyóeszközök. Időspórolás.
Mik a PCR lépései?
A PCR három egyszerű lépésen alapul, amelyek bármely DNS-szintézis reakciójához szükségesek: (1) a templát denaturálása egyetlen szálra; (2) a primerek összekapcsolása minden eredeti szálhoz az új szál szintéziséhez ; és (3) az új DNS-szálak kiterjesztése a primerekből.
Mi a standard PCR?
A standard PCR-hez csak egy DNS-polimerázra, magnéziumra, nukleotidokra, primerekre , az amplifikálandó DNS-templátra és egy termociklerre van szüksége. ... A PCR-t széles körben használják DNS amplifikálására későbbi kísérleti felhasználásra. A PCR-t genetikai vizsgálatokban vagy patogén DNS kimutatására is alkalmazzák.
Mi a PCR négy lépése?
- 1. lépés – Denaturálás. A csőben lévő oldatot legalább 94 °C-ra (201,2 °F) melegítjük fel hőciklus segítségével. ...
- 2. lépés – izzítás. ...
- 3. lépés – Kiterjesztés. ...
- 4. lépés – Elemzés elektroforézissel.
Mi az a Real-Time PCR gép?
A valós idejű PCR detektáló rendszer egy hőciklusból áll, amely optikai érzékelő modullal van felszerelve, amely méri az egyes amplifikációs ciklusok során keletkező fluoreszcens jelet, amikor a fluorofor kötődik a célszekvenciához.
Hogyan készítsünk PCR tesztet?
- Ellenőrizze a meglévő primereket a szakirodalomban és az adatbázisokban.
- Válasszon egy célsorozatot.
- Tervezési alapozók.
- Ellenőrizze a primer specifitását.
- Értékelje a primer tulajdonságait (olvadási hőmérséklet [T m ], másodlagos szerkezet, komplementaritás).
- Határozza meg a PCR termék tulajdonságait.
Mit csinál a Hot Start PCR?
A Hot Start PCR lehetővé teszi a reakció szobahőmérsékleten történő beállítását nem specifikus amplifikáció és primer dimer képződés nélkül . Míg a hagyományos PCR-t gyakran használják a DNS-célszekvencia exponenciális másolatainak elkészítésére további hőmérséklet-érzékeny reakcióaktiváló komponens nélkül.
Mire használható a digitális PCR?
A digitális polimeráz láncreakció (digitális PCR, DigitalPCR, dPCR vagy dePCR) a hagyományos polimeráz láncreakciós módszerek biotechnológiai finomítása, amely felhasználható nukleinsavszálak, köztük DNS, cDNS vagy RNS közvetlen mennyiségi meghatározására és klónozására .
Hogyan készítsünk primert multiplex PCR-hez?
- A PCR primereket általában 18-30 bp hosszúra tervezték. ...
- A primerek olvadási hőmérsékletének (Tm) 58°C és 60°C között kell lennie, és a reakcióban lévő összes primer Tm-értéke 0,5 - 1°C között legyen. ...
- A primerek GC-tartalma 40% és 60% között legyen.
Mire használható az aszimmetrikus PCR?
Az aszimmetrikus PCR segítségével egyszálú DNS-t lehet előállítani kétszálú DNS-ből , amelyet azután DNS-szekvenáláshoz használnak fel a mutagenezis módszerben. Az egyszálú DNS az aptamer generálásához is fontos.
Mi a PCR alapelve?
Elve a DNS-polimeráz használatán alapul, amely specifikus DNS-szekvenciák in vitro replikációja. Ezzel a módszerrel egy adott DNS-fragmens (az érdeklődésre számot tartó szekvencia, a kérdéses DNS vagy a cél-DNS) több tízmilliárd másolatát lehet előállítani DNS-kivonatból (DNS-templát).
Mi a PCR 5 lépése?
- 1. lépés: DNS izolálás.
- 2. lépés Alapozó tervezés.
- 3. lépés Enzim kiválasztása.
- 4. lépés Termikus kerékpározás.
- 5. lépés Amplikon elemzés.
Mi szükséges a PCR-hez?
A PCR reakció kulcsfontosságú összetevői a Taq polimeráz, a primerek, a templát DNS és a nukleotidok (DNS építőelemek). Az összetevőket egy csőben állítják össze, az enzimhez szükséges kofaktorokkal együtt, és ismételt melegítési és hűtési ciklusokon mennek keresztül, amelyek lehetővé teszik a DNS szintetizálását.
Mi a különbség a Singleplex és a multiplex PCR között?
A hagyományos singleplex PCR során egyetlen célpontot amplifikálnak egyetlen reakciócsőben. Ezzel szemben a multiplex PCR lehetővé teszi több célszekvencia egyidejű amplifikációját egyetlen csőben , specifikus primerkészletek és spektrálisan eltérő fluoroforokkal jelölt próbákkal kombinálva.
Melyek a beágyazott PCR alkalmazásai?
A Rickettsia, Bartonella és hasonló mikroorganizmusok beágyazott PCR alkalmazásai a vérben (bakteremia) és a szövetekben , herpeszvírus és enterovírus kimutatása a CSF-ben, és. M. tuberculosis kimutatása köpetmintában.
Mi a PCR 3 típusa?
- Valós idejű PCR.
- Kvantitatív valós idejű PCR (Q-RT PCR)
- Reverz transzkriptáz PCR (RT-PCR)
- Multiplex PCR.
- Beágyazott PCR.
- Hosszú távú PCR.
- Egysejtű PCR.
- Gyors ciklusú PCR.
Melyek a PCR fő típusai?
- Valós idejű PCR (kvantitatív PCR vagy qPCR)
- Reverz transzkriptáz (RT-PCR)
- Multiplex PCR.
- Beágyazott PCR.
- High Fidelity PCR.
- Gyors PCR.
- Hot Start PCR.
- GC-Rich PCR.
Milyen műszert használnak a PCR-hez?
A Thermal Cycler (más néven Thermocycler, PCR Machine vagy DNS Amplifier) egy laboratóriumi berendezés, amelyet DNS-szegmensek polimeráz láncreakción (PCR) keresztül történő amplifikálására használnak. A készüléknek van egy hőblokkja lyukakkal, ahová a PCR reakcióelegyeket tartó csövek behelyezhetők.