Mi az a lipofektamin transzfekció?
Pontszám: 4,8/5 ( 55 szavazat )A Lipofectamine vagy Lipofectamine 2000 egy általános transzfekciós reagens , amelyet az Invitrogen gyárt és értékesít, és amelyet a molekuláris és sejtbiológiában használnak. Az RNS (ideértve az mRNS-t és az siRNS-t is) vagy a plazmid DNS transzfekciós hatékonyságának növelésére használják in vitro sejttenyészetekbe lipofekcióval.
Mit csinál a Lipofectamine 3000 reagens?
A Lipofectamine® 3000 reagens alkalmas új genomszerkesztési alkalmazásokhoz . A rendkívül hatékony transzfekció révén növeli a sikeres hasítás és rekombináció valószínűségét a TALEN-ekkel vagy CRISPR-ekkel, végső soron maximalizálva a genetikai módosítások hatékonyságát és leegyszerűsítve a későbbi folyamatokat.
Hogyan működik a lipid alapú transzfekció?
A lipofekció, más néven „lipid transzfekció” vagy „liposzóma alapú transzfekció” , lipidkomplexet használ a DNS sejtekbe juttatására . ... A liposzómától és a sejttípustól függően a liposzóma endocitizálható (11.6D ábra), vagy közvetlenül fuzionálható a sejtmembránnal, hogy a DNS-konstrukciót a sejtekbe engedjék (11.6E. ábra).
Mi a különbség a lipofectamin 2000 és 3000 között?
A Lipofectamine 3000 reagens magasabb transzfekciós hatékonyságot eredményez, mint a Lipofectamine 2000 reagens, ha különféle sejtvonalakon tesztelik.
A lipofektamin mérgező a sejtekre?
Bár a Lipofectin mutatta a legalacsonyabb toxicitást a HepG2 sejtekre (89,54% életképesség), a transzfekciós hatékonysága is a legalacsonyabb (8,29%). Általában a HepG2 sejtek rezisztenciát mutattak a legtöbb vizsgált reagens toxicitásával szemben, a Lipofectamine 3000 (70,59%-os életképesség) pedig a legtoxikusabb reagens .
Plazmid DNS transzfekciós protokoll
Lejár a Lipofectamine?
A ThermoFisher szerint a lipofectamine 3000 a gyártási dátumtól számított 2 évig használható fel, ha megfelelően tárolják (4 fokos hűtőszekrényben kell tárolni). Az Optimem érzékeny a lejáratra. Azt javaslom, hogy a kísérlethez az új reagenseket használja. Remélem ez segít!
Melyik transzfekciós reagens a legjobb?
A tesztelt körülmények között a ViaFect™ Reagent a legtöbb sejtvonal esetében a transzfekciós hatékonyság és az alacsony toxicitás legjobb kombinációját kínálta, így ideális választás egy új sejtvonallal végzett transzfekciós kísérletek megkezdésekor.
Hogyan növelheti a lipofektamin transzfekció hatékonyságát?
- Transzfektálja az egészséges, aktívan osztódó sejteket állandó sejtsűrűséggel. ...
- Transzfektálja kiváló minőségű DNS-sel. ...
- Optimalizálja a sejtek transzfektálásához használt DNS mennyiségét. ...
- Optimalizálja a transzfekciós reagens:DNS arányt.
A lipofektamin kationos?
A Lipofectamine vagy Lipofectamine 2000 egy általános transzfekciós reagens, amelyet az Invitrogen gyárt és értékesít, és a molekuláris és sejtbiológiában használatos. ... A lipofektamin kationos lipidmolekuláit semleges társ-lipiddel (segítő lipiddel) alkotják.
Mi a különbség a transzdukció és a transzfekció között?
A transzfekció az a folyamat, amikor nukleinsavakat juttatnak a sejtekbe nem vírusos módszerekkel. A transzdukció az a folyamat, amelynek során egy vírusvektoron keresztül idegen DNS-t juttatnak be egy másik sejtbe.
Stabil a Lipofectamine transzfekció?
A stabil transzfekció megköveteli, hogy a transzfektált DNS beépüljön a sejt kromoszómáiba. ... Stabil transzfekciókat végzek Lipofectaminnal, szóval ez nem probléma. Azt mondták, hogy a linearizált plazmidok jobban integrálódnak, mint a szuperspirált plazmidok, de a szuperspirált plazmidok jobb transzfekciót biztosítanak.
Hogyan működnek a transzfekciós reagensek?
A sejtbe történő felvételkor a transzfekciós komplexek intracelluláris vezikulákba kötődnek. Transzfekciós reagenseink képesek a nukleinsavak citoplazmába történő felszabadulását indukálni hólyagos membránszakadás vagy fúzió révén .
Hogyan működik a transzfekció?
A transzfekció az a folyamat, amelynek során csupasz vagy tisztított nukleinsavakat juttatnak be az eukarióta sejtekbe . ... Az állati sejtek transzfekciója jellemzően átmeneti pórusok vagy "lyukak" megnyitásával jár a sejtmembránban, hogy lehetővé tegye az anyag felvételét.
Mi az a P3000 Lipofectamine?
Lipofectamine 3000: Ez maga a transzfekciós reagens, amelyet külön csőben hígítanak, és akár 20 percig is stabil marad. ... P3000 reagens: Ezt a reagenst a hígított DNS-oldathoz adják , és feladata, hogy segítse a nukleinsavak bejutását a sejtbe és a sejtmagba.
Hogyan működik a P3000 reagens?
A keverékhez hozzáadva a Lipofectamine 3000 bevonja a p3000 lipidcseppeket, és pozitív töltést biztosít a liposperák külsejének. Ez a pozitív töltés lehetővé teszi a lipidcseppek endocitózisát a negatív töltésű sejtmembránba.
A plazmidok replikálódnak?
A plazmid egy kis DNS-molekula egy kamrában, amely fizikailag el van választva a kromoszómális DNS-től, és függetlenül képes replikálódni [6].
Mi az a Lipofectamine RNAiMAX?
A Lipofectamine® RNAiMAX egy szabadalmaztatott RNSi-specifikus kationos lipid készítmény , amelyet kifejezetten siRNS és miRNS szállítására terveztek minden sejttípusba.
Mi a különbség a stabil és az átmeneti transzfekció között?
A stabil transzfekció során a plazmid DNS sikeresen beépül a sejt genomjába, és továbbadódik a sejt következő generációinak. Az átmeneti transzfekció során azonban a transzfektált anyag bejut a sejtbe, de nem integrálódik a sejt genomjába .
Milyen a jó transzfekciós hatékonyság?
A kationos lipidek által közvetített transzfekció esetén a tapadó sejtek általában 70–90%-os konfluenciája , vagy a szuszpenziós sejtek esetében 5 × 10 5–2 × 10 6 sejt/ml jó eredményt ad a transzfekció idején. ... Hasonlóképpen, az aktívan osztódó sejtvonalakat is hatékonyabban transzdukálják vírusvektorok.
Mi az elfogadható transzfekciós hatékonyság?
A sejtek életképessége Ha a transzfekciós folyamat egészét tekintjük, a transzfekció hatékonysága és a sejtek életképessége szorosan összefügg – nincs értelme a magas transzfekciós hatékonyságnak, és egyetlen sejt sem éli túl. A transzfekció előtt a sejteknek >90%-ban életképesnek kell lenniük, és időt kell adni nekik, hogy felépüljenek az passzázsból.
Hogyan növelheti a transzfekció hatékonyságát?
- A még aktívan osztódó egészséges sejtek transzfektálása.
- Nukleinsavak optimalizálása (mind jó minőségű, mind megfelelő mennyiségben)
- Korrekció az egyedenkénti sejtpopulációra.
Mérgező a transzfekció?
Az optimális konfluencia a transzfekció idején 60-80% a tapadó sejtek esetében. A sejtek kisebb sűrűségű transzfekciója gyakran celluláris toxicitáshoz vezet a sejtenként szállított komplexek számának növekedése miatt.
Mik azok a transzfekciós reagensek?
A kémiai transzfekciós reagensekkel végzett transzfekciók elektrosztatikus kölcsönhatásokon alapulnak a nukleinsavakhoz való kötődéshez és a célsejtmembránokhoz . ... A kalcium-foszfát alkalmazása a nukleinsavak sejtekbe való bejuttatásának legrégebbi és legolcsóbb módja.
Hogyan működik a kalcium-foszfát transzfekció?
A DNS emlőssejtekbe történő bejuttatására szolgáló kalcium-foszfát-transzfekciós módszer kalcium-foszfát-DNS-csapadék képzésén alapul. A kalcium-foszfát elősegíti a DNS kötődését a sejtfelszínhez. A DNS ezután endocitózissal belép a sejtbe.