Mi az a digitonin extrakció?
Pontszám: 5/5 ( 38 szavazat )A digitoninnal történő extrakció optimális koncentrációban és perfúziós időben egyidejűleg tartja a sejtben a citoszkeletont és a membránszervszerveket, és módszert biztosít e két komponens közötti kölcsönhatások tisztázására.
Mit tesz a digitonin a sejtekkel?
A Digitonint sejtpermeabilizáló szerként használják, mivel ez egy gyenge nemionos detergens, amely alacsony koncentrációban szelektíven teszi áteresztővé a plazmamembránt, aminek következtében citoszolos komponensek szabadulnak fel, de más organellumokat érintetlenül hagynak.
Mit jelent a digitonin?
A Digitonin egy szteroid szaponin (saraponin), amelyet a Digitalis purpurea gyűszűvirágból nyernek . Aglikonja a digitogenin, egy spirosztán szteroid. ... A digitonint néha összetévesztik a szívgyógyszerekkel, a digoxinnal és a digitoxinnal, és mindhárom ugyanabból a forrásból nyerhető ki.
Hogyan szerezhetsz 10%-ot a digitoninból?
oldjunk fel 1 g/57 ml-t abszolút etanolban és 1 g/220 ml-t 95%-os etanolban. A digitonin törzsoldatait (pl. 10 % w/v vagy 1 mg/ml) vízben vagy pufferben (pl. pH 7,2-7,5) melegítéssel (95-100°C) vagy vortexezéssel lehet előállítani, amíg tiszta oldatot nem kapunk.
A digitonin egy szaponin?
A digitonin egy szteroid, monodezmosid szaponin (1A, B ábra). Egy pentaszacharid részt tartalmaz, amely két galaktózból, két glükózból és egy xilóz monoszacharidból áll. A digitonin természetesen egy mindenütt jelen lévő növényben, a Digitalis purpurea-ban fordul elő [8].
Fehérje extrakció a sejtekből 1. rész
Mérgező a Digitonin?
Az anyag irritálhatja a nyálkahártyát és a felső légutakat. Szem-, bőr- vagy légzőrendszeri irritációt okozhat. Belélegezve, lenyelve vagy bőrrel érintkezve mérgező . Legjobb tudomásunk szerint a toxikológiai tulajdonságokat nem vizsgálták alaposan.
Hogyan oldjuk fel a Digitonint vízben?
Vízben való oldás: Forrásban lévő vízben (1g/10 ml) oldódik. Melegítse 15 percig 98 °C-on. Lehűtjük, 3 órára 4 °C-ra helyezzük, majd a csapadékot kiszűrjük. Digitonin-permeabilizált zsírsejtek alkalmazása cAMP vizsgálatokhoz.
A Digitonin egy glikozid?
A digitonin a Digitalis purpurea-ból nyert glikozid ; az aglikon a digitogenin. Mosószerként használva hatékonyan oldja vízben a lipideket.
Le tudod fagyasztani a Digitonint?
Digitonin (5%) Oldjunk fel 50 mg digitonint 1 ml DMSO-ban. Tartsa szobahőmérsékleten legfeljebb 1 hétig, vagy fagyassza le -20 °C-on.
Hogyan készítsünk Digitonin oldatot?
Oldjunk fel 6 g kereskedelmi digitonint 150 ml abszolút etanolban 75 °C-on. A digitonint úgy választják ki, hogy az oldatot 0 °C-on (jeges víz) 20 percig hűtik, majd 4 °C -on centrifugálással elválasztják.
Hány membránból áll a magburok?
A nukleáris burok összetett szerkezetű, két magmembránból , az alatta lévő nukleáris rétegből és nukleáris póruskomplexekből áll (8.1. ábra). A magot két koncentrikus membrán rendszer veszi körül, amelyeket belső és külső magmembránnak neveznek.
Hogyan oldja fel a Digitonint DMSO-ban?
- Mérjünk le 10 mg digitonint.
- Oldjuk fel 1 ml DMSO-ban.
- Osszuk 0,1 ml-es részekre.
- -20 °C-on tárolandó.
A glikozid cukor?
A kémiában a glikozid /ˈɡlaɪkəsaɪd/ egy olyan molekula, amelyben egy cukor glikozidos kötésen keresztül egy másik funkciós csoporthoz kapcsolódik . A glikozidok számos fontos szerepet játszanak az élő szervezetekben. Sok növény inaktív glikozidok formájában tárolja a vegyszereket.
Hogyan tárolja a Digitonint?
-20°C-on tárolandó. Kiszáradási körülmények között tárolandó . A termék legfeljebb 12 hónapig tárolható.
Mi az a DMSO megoldás?
A DMSO vagy dimetil-szulfoxid a papírgyártás mellékterméke . A fában található anyagból származik. A DMSO-t az 1800-as évek közepe óta használják ipari oldószerként. A 20. század közepétől a kutatók feltárták a gyulladáscsökkentő szerként való használatát.
Miért nevezik nukleáris buroknak?
A nukleáris burok, más néven nukleáris membrán, két lipid kettősrétegű membránból áll, amelyek az eukarióta sejtekben körülveszik a magot , amely körülveszi a genetikai anyagot. A magburok két lipid kettősrétegű membránból áll: egy belső magmembránból és egy külső magmembránból.
Mi a nukleáris burok fő funkciója?
A nukleáris burok elkülönítve tartja a sejtmag tartalmát, az úgynevezett nukleoplazmát a sejt citoplazmájától. A mindennél fontosabb genetikai anyagot, főleg a DNS-t elkülönítve és viszonylag biztonságosan tartják a citoplazmában lezajló kémiai reakcióktól.
Mi történne, ha nem lenne nukleáris burok?
A magmembrán nélkül a sejt összeomlana és meghalna . A sejtmembrán nélkül bármilyen vegyi anyag bejuthatna. A membránok nagyon fontosak, mert segítenek megvédeni a sejtet. Az anyagok diffúzió útján mozognak a membránon.
Az igepal ugyanaz, mint az NP-40?
A Sigma-Aldrich a Nonidet P-40-et az IGEPAL CA-630 -ra cserélte, amelyet "nem ionos, nem denaturáló mosószerként" írnak le. A Sigma-Aldrich azt állítja, hogy az IGEPAL CA-630 "kémiailag megkülönböztethetetlen a Nonidet P-40-től".
Mi a funkciója az NP-40 mosószernek?
Az NP-40-et gyakran használják a sejten belüli összes membrán feltörésére, beleértve a nukleáris membránt is . Ha csak a citoplazmatikus membránt akarja megtörni, más detergensek, például az IGEPAL CA-630 is használhatók. Az NP-40 alkalmazható a papír- és textilfeldolgozásban, a festékekben és bevonatokban, valamint az agrokémiai gyártásban.
Mi a funkciója az NP-40 mosószernek az extrakciós pufferben?
Az NP-40 vagy a Triton X-100 lízispufferrel bizonyos fokú integritást meg kell őrizni. Az NP-40 (Nonidet P-40) és a Triton X-100 enyhébb, nemionos mosószerek. Jók a membránfehérjék szolubilizálásában és a citoplazmatikus fehérjék izolálásában.
Mit jelent az Al puffer?
DNS). 5. Adjon hozzá 200 µl AL puffert ( a sejtek feltörésére szolgáló lízispuffer ). 6.
Mi az extrakciós puffer célja?
Az extrakciós pufferek, amelyeket néha lízispuffernek is neveznek, egy pufferoldat, amelyet nyitott sejtek feltörésére használnak, és a sejtek vegyületeit elemző molekuláris biológiai kísérletekben használják fel . A legtöbb lízispuffer sókat tartalmaz a lizátum savasságának és ozmolaritásának szabályozására.
Miért használnak hideg alkoholt a DNS-kinyeréshez?
Fontos, hogy hideg alkoholt használjunk, mert ez lehetővé teszi nagyobb mennyiségű DNS kinyerését . Ha az alkohol túl meleg, az a DNS denaturálódását [félkövér] vagy lebomlást okozhatja. A centrifugálás során a DNS pelletté kondenzálódik.