Fluoreszcens polarizációs immunvizsgálatban?
Pontszám: 4,7/5 ( 44 szavazat )A fluoreszcens polarizációs immunoassay (FPA) egy homogén immunoassay, amely az antitest vagy antigén gyors és pontos kimutatására használható . A vizsgálat elve az, hogy egy fluoreszcens festéket (antigénhez vagy antitest-fragmenshez kapcsolva) síkban polarizált fénnyel lehet gerjeszteni a megfelelő hullámhosszon.
Mi a célja a fluoreszcens polarizációnak?
A fluoreszcens polarizáció (FP) egy homogén módszer, amely lehetővé teszi a különböző molekuláris kölcsönhatások és enzimaktivitások gyors és kvantitatív elemzését .
Mi az FP assay?
A fluoreszcencia polarizációs (FP) technológia a molekula rotáció mérésén alapul, és széles körben alkalmazzák az oldatban lévő molekuláris kölcsönhatások vizsgálatára. Ez a módszer használható két molekula közötti kötődés és disszociáció mérésére, ha az egyik kötőmolekula viszonylag kicsi és fluoreszkáló.
A fluoreszcencia polarizált?
A fluoreszcencia polarizáció a két érték súlyozott átlaga , amely közvetlen értékelést nyújt a molekula/ligandum kötődés frakciójáról. Így a fluoreszcencia polarizációs mérések is jelzik a nagyobb molekula/ligandum komplexek képződését. 4.5. ábra. A fluoreszcencia polarizáció elve.
Hogyan történik a fluoreszcens polarizációs immunoassay mérése?
A fluoreszcencia polarizációs immunvizsgálatok fluoroforhoz kötött antigént alkalmaznak, amely a kérdéses antitesthez kötve növeli a fluoreszcens polarizációt. A polarizáció változása arányos a mintában lévő antigén mennyiségével, és fluoreszcens polarizációs analizátorral mérjük.
FLUORESZCENCIA POLARIZÁCIÓS IMMUNOASSAY
Miért fontos a fluoreszcens polarizációs immunvizsgálat?
A fluoreszcens polarizációs immunoassay (FPA) egy homogén immunoassay , amely az antitest vagy antigén gyors és pontos kimutatására használható . ... Mivel elsődleges antigén-antitest kölcsönhatásról van szó, a reakció sebessége nagyon gyors, és az eredmény általában percek alatt elérhető.
Hogyan működik a fluoreszcens anizotrópia?
A fluoreszcencia anizotrópia vagy fluoreszcencia polarizáció egy molekula térbeli változó orientációjának mérése az abszorpció és az emisszió közötti idő függvényében. ... Minél lassabb a mozgás, annál jobban megőrzi a kibocsátott fény polarizációját.
Hogyan végezzük a fluoreszcens anizotrópiát?
Fluoreszcens anizotrópia kísérletek A méréseket 25 °C-on 200 µl-es küvettában, 5 mm-es úthosszal 10 végeztük. Tegyünk 200 µl 30 nM SBDS-FlAsH-t egy fluoreszcens küvettába anizotrópia pufferbe, és titráljunk 2 µl 30 µM EFL1-et. Alaposan keverje össze és hagyja állni a reakciót 3 percig, mielőtt megmérné az anizotrópia értékét.
Mi a drog és az FP?
A fluoreszcencia polarizációs vizsgálatokat (FP assays) számos módon használják. Az oldatban lévő molekulák feltárásától a gyógyszerszintek klinikai körülmények közötti monitorozásáig, és lehetővé teszik a gyógyszerkutatást. ... Sőt, a tudósok az FP-t használják kis molekula-fehérje, antigén-antitest és hormon-receptor kötődés tanulmányozására.
Mi az a kompetitív FP vizsgálat?
A kompetitív FA/FP immunoassay-t kis molekulák kimutatására számos területen alkalmazzák , mint például az inhibitorok szűrésére, a terápiás gyógyszerek monitorozására, valamint a peszticidek és toxinok kimutatására [4], [5]. Ez az immunoassay egy immunantitestet alkalmaz affinitásligandumként, és egy fluoroforral jelölt kis molekula célpontot nyomjelzőként.
Mi az a fluoreszcens polarizációs spektroszkópia?
A fluoreszcencia polarizációs spektroszkópia az egyik ilyen módszer, amely a gerjesztésre használt fény polarizációja és a fluoreszcenciából utólag detektált fény közötti kapcsolatot vizsgálja .
Mi az időfelbontású fluoreszcencia?
A minta fluoreszcenciája a fényimpulzussal történő gerjesztést követő idő függvényében . ... Az egyértelműség kedvéért ezt az eljárást gyakran fluoreszcencia élettartam mérésnek nevezik.
Mi a fluorokróm és hogyan használják?
A fluoreszcens festékeket (vagy fluorokrómokat) általában detektáló reagensként használják különféle alkalmazásokban, például sejtképalkotásban és áramlási citometriában. A fluorokrómok egy meghatározott hullámhosszú fényenergiát nyelnek el, és hosszabb hullámhosszon bocsátják ki újra. ... A fluorokrómok a fénykibocsátásuk intenzitásában különböznek.
Mi az a FRET elemzés?
A FRET a távolságtól függő energiaátvitelen alapul egy donormolekulától egy akceptormolekuláig. A távolságra való érzékenysége miatt a FRET-et molekuláris kölcsönhatások vizsgálatára használták. A FRET az energia sugárzás nélküli átvitele a donor molekulától az akceptor molekuláig.
Miért fordul elő fluoreszcencia?
A fluoreszcencia akkor következik be , amikor az elektronok szingulett gerjesztett állapotból visszatérnek az alapállapotba . Egyes molekulákban azonban a gerjesztett elektronok spinjei hármas állapotba kapcsolhatók egy rendszerközi kereszteződésnek nevezett folyamat során. Ezek az elektronok addig veszítenek energiát, amíg hármas alapállapotba nem kerülnek.
Milyen fényt használ a fluoreszcens mikroszkóp?
A biológiában manapság használt fluoreszcens mikroszkópok többsége epifluoreszcens mikroszkóp, ami azt jelenti, hogy mind a gerjesztés, mind a fluoreszcencia megfigyelése a minta felett történik. A legtöbben Xenon vagy Mercury ívkisülési lámpát használnak az intenzívebb fényforráshoz.
Melyek a különböző fluoreszcens kioltási eljárások?
A fluoreszcencia kioltása minden olyan folyamatra vonatkozik, amely csökkenti a minta fluoreszcencia intenzitását. Különféle molekuláris kölcsönhatások eredményezhetnek kioltást. Ide tartoznak a gerjesztett állapotú reakciók, a molekuláris átrendeződések, az energiaátvitel, az alapállapotú komplexek képződése és az ütközési kioltás .
Mekkora az anizotrópia értékek tartománya?
Az anizotrópia értékek meghaladhatják a 0,4-et többfoton gerjesztés esetén (18. fejezet). ahol β az abszorpciós és emissziós átmenetek közötti szög. Az r0 kifejezést más depolarizáló folyamatok, például rotációs diffúzió vagy energiaátvitel hiányában megfigyelt anizotrópiára használjuk.
Milyen körülmények között arányos a fluoreszcencia intenzitása a koncentrációval?
Fluoreszcencia spektroszkópia Abban az esetben, ha az optikai sűrűség kisebb, mint 0,07 , a fluoreszcencia intenzitása arányos a koncentrációval, így nagyon kényelmes több fluoreszcencia spektrumot összehasonlítani egymással.
Mi a negatív anizotrópia?
A negatív érték azt jelenti, hogy a merőleges fluoreszcencia intenzitása nagyobb volt, mint a párhuzamos intenzitás. Negatív anizotrópia lehetséges. Az értékek -0,2 és +0,4 között lehetnek.
Hogyan működik a fluoreszcens immunoassay?
A fluoreszcens immunoassay egyszerűen egy másik típusú immunoassay. ... Egy modern fluoreszcens alapú immunoassay detektáló reagensként egy fluoreszcens vegyületet használ, amely fényt vagy energiát (gerjesztési energiát) nyel el egy adott hullámhosszon, majd más hullámhosszon bocsát ki fényt vagy energiát.
Hogyan működik az enzim immunoassay?
Enzim-immunoassay-t (EIA) használnak az antigének megjelenítésére és mennyiségi meghatározására . Egy enzimhez konjugált antitestet használnak az antigén megkötésére, és az enzim a szubsztrátot megfigyelhető végtermékké alakítja. A szubsztrát lehet kromogén vagy fluorogén.
Hogyan működik a Cedia immunoassay?
A klónozott enzim-donor immunoassay (CEDIA) egy kompetitív homogén enzimes immunoassay. Ez a vizsgálat egy enzim két komponensű fragmensét használja fel, amelyek külön-külön inaktívak . ... Az antitestért versengés megy végbe a mintában lévő analit és az enzim-fragment-analit-konjugátum között.
Hogyan működik az Enzyme Multiplied immunoassay technika?
Az enzim-multiplied immunoassay technika ( EMIT® ) egy egyszerű, gyors homogén módszer, amelyet manapság általánosan alkalmaznak anyagok (különösen gyógyszerek) széles körének mérésére. A technika azon az alapon működik, hogy a jelenlévő gyógyszer arányos az enzimszubsztrát-reakció gátlásával .