Hogyan készítsünk szaponin oldatot?
Pontszám: 4,8/5 ( 13 szavazat )A szaponináteresztő oldatot úgy készítjük, hogy 0,5 g szaponint összekeverünk és feloldunk 100 ml 5X PBS-sel (pH 7,4), majd szubmikronos szűrést és/ vagy autoklávozást végzünk 15 PSI nyomáson 60 percig.
Hogyan készítsünk 10%-os szaponin oldatot?
10% szaponin törzs: Keverjen el 5 g szaponint (Sigma #S-7900) 50 ml CMF-PBS-ben . Helyezze 37 °C-ra, amíg a szaponin teljesen fel nem oldódik. Az oldat szűréséhez használjon 50 ml-es fecskendőt 0,2 μm-es eldobható szűrőpatronnal.
Hogyan készítsünk 1%-os szaponinoldatot?
Használata: 1) Készítsen 1x munkaoldatot úgy, hogy 10x FACSLyse oldatot hígít desztillált vízzel . a. Például adjon 1 ml 10x alaplevet 9 ml desztillált vízhez.
Hogyan lehet feloldani a polihémát?
Például oldjunk fel 2,4 gramm polyhemát 20 ml 95%-os etanolban (50 ml-es falcon csőben). Ezután zárja le parafóliával, és tegye fel egy kerékre 55 Celsius fokon egy éjszakára. Ez a megoldás 10X. Hígítsa fel 1:10 arányban 95%-os etanollal, hogy a végső oldat 1,2%-os legyen.
Hogyan készítsünk 5%-os szaponint?
5 tömeg/térfogat%-os oldat készítéséhez (10x) oldjunk fel 5 gramm szaponint (Sigma 47036-50g-F) 80 ml vízben. Egy éjszakán át 4 °C-on rázva, 100 ml-rel alaposan keverjük össze, amíg fel nem oldódik, szűrjük át, sterilizáljuk 0,2 um-es szűrőn, és 4 °C-on tároljuk.
Gél-tej vízmentes tisztító természetes szaponinnal
Hogyan készíted a polyHEMA-t?
A polyHEMA oldat elkészítéséhez mérjen ki 1,5 g polyHEMA-t, és helyezze egy steril üvegbe. Adjon hozzá 95 ml molekuláris biológiai minőségű abszolút etanolt és 5 ml sejttenyészet minőségű desztillált vizet . A poliHEMA hidrogél feloldódik az oldat víztartalmában, az etanol pedig sterilizálja a készítményt.
Hogyan készítsünk higromicin törzsoldatot?
Elkészítési utasítások A Hygromycin B >50 mg/ml vízben oldódik. 2 Metanolban vagy etanolban is oldódik. Az oldatokat szűréssel kell sterilizálni , nem autoklávozással. A higromicin B-t 50 mg/ml koncentrációban vízben oldjuk, majd sterilen szűrjük a H 0654 előállításához, vagy y-besugárzással H 5527 előállításához.
Hogyan készítsünk puromicin törzsoldatot?
Ez a termék 50 mg/ml vízben oldódik. A törzsoldatot 0,22 μm-es szűrővel történő szűréssel kell elkészíteni, majd aliquot részekben -20 °C-on tárolni. Ez a termék 10 mg/ml koncentrációban metanolban is oldódik.
Hogyan készítsünk permeabilizációs puffert?
A. 1X foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS): 1 L 1X PBS elkészítéséhez: adjunk hozzá 100 ml 10X PBS-t (#12528) 900 ml vízhez, keverjük össze. Sejtpermeabilizációs puffer: Vásároljon használatra kész terméket (#39487), vagy 10 ml elkészítéséhez adjon hozzá 30 µl Triton™ X-100-at 10 ml antitesthígító pufferhez. 4°C-on tárolandó.
Hogyan készítsünk kollagenáz törzsoldatot?
Az enzimaktivitás mérésére enzim törzsoldatot készítünk úgy, hogy 0,05-0,1 mg/ml kollagenázt 0,36 mM kalcium-kloridot tartalmazó 50 mM TES pufferben, pH 7,4 (37 ºC) oldunk. A reakcióelegy végső koncentrációja 50 mM TES, 0,36 mM kalcium-klorid, 25 mg kollagén (termékszám:
Mi az a szaponin kivonat?
A szaponinok vízben és zsírban is oldódnak , ami hasznos szappantulajdonságokat ad nekik. ... Néhány példa ezekre a vegyszerekre: glicirrizin, édesgyökér aroma; és a quillaia (alt. quillaja), az italokban használt kéregkivonat.
Mit tesz a szaponin a sejtekkel?
A szaponin, a detergenshez hasonló molekula képes permeabilizálni a sejtmembránokat anélkül, hogy elpusztítaná azokat, így áramlási citométerrel ép sejteken intracelluláris antigének kimutatására használható.
Lehet-e permeabilizálni a sejteket rögzítés nélkül?
A plazmamembránhoz közeli antigének és az oldható citoplazmatikus antigének enyhe sejtpermeabilizációt igényelnek rögzítés nélkül . A citoszkeletális, vírus- és egyes enzimantigének általában optimális eredményt adnak, ha magas koncentrációjú acetonnal, alkohollal vagy formaldehiddel rögzítik.
Mi az a permeabilizációs puffer?
Termékleírás. A permeabilizációs puffer egy használatra kész permeabilizációs puffer intracelluláris immunfluoreszcens festéshez, mikroszkópiához vagy áramlási citometriához. Használatra kész pufferolt mosószer oldat. Permeabilizálja a rögzített sejteket mikroszkópos és áramlási citometriai alkalmazásokhoz.
Hogyan lehet permeabilizálni egy sejtet?
A sejtek permeabilizálása metanolos vagy acetonos rögzítéssel vagy detergens használatával lehetővé teszi az antitestek átjutását a sejtmembránon és a sejtbe. A sejtpermeabilizáláshoz leggyakrabban használt reagens a nemionos detergens, a Triton X-100.
Mibe hígítod a puromicint?
1 mg/ml-es puromicin törzsoldatot használva készítsen öt hígítást 2x végső koncentrációban, az 1. táblázat C és D oszlopában látható módon hígítva a törzsoldatot. (Ha a 2x antibiotikum-koncentrációt azonos térfogatú sejtszuszpenzióval hígítjuk, az 1. táblázat B oszlopában látható végső koncentrációt eredményezi.
Hogyan működik a puromicin szelekció?
Ez a vegyület úgy működik , hogy megszakítja a fehérjeszintézist mind a prokarióta, mind az eukarióta sejtekben . Ez a sejtek elpusztulását okozza, hacsak nincs bennük rezisztenciagén, amely lehetővé teszi számukra, hogy túléljék az antibiotikum hatását.
Hogyan oldja fel a puromicin port?
Elkészítési útmutató A termék vízben oldódik (50 mg/ml), így tiszta, színtelen vagy halványsárga oldatot kapunk. A törzsoldatot át lehet engedni egy 0,22 µm-es szűrőn, és aliquot részekben –20 °C-on tárolni. Metanolban (10 mg/ml) is oldódik.
Mi az a poly Hema?
polyHEMA, teljes poli-2-hidroxi-etil-metakrilátban , puha, rugalmas, vízelnyelő műanyag, amelyet lágy kontaktlencsék készítésére használnak.
Meg lehet festeni a sejteket rögzítés nélkül?
Ne feledje, hogy rögzítés nélkül a minta széteshet, vagy epitópokat veszíthet. A festést elvégezheti az extracelluláris marker POST rögzítéséhez/permeabilizálásához/intracelluláris festéshez . Ebben az esetben a rögzítés nem befolyásolja a fluorokrómot (pl. APC-Cy7).
Milyen gyorsan tud fix cellákat forgatni?
Centrifugálja 5 percig 1500-2000 fordulat/ perc sebességgel. A sejtek a fixálás után lendületesebbé válnak. Ha a pellet túl kicsi, centrifugálja újra magasabb fordulatszámon, de ne haladja meg a 3000 RPM-et.
Lehet permeabilizálni az élő sejteket?
Amellett, hogy permeabilizálja a rögzített elhalt sejtek membránját, a TX100 élő sejteket is képes permeabilizálni, hogy olyan molekulákat szállítson, amelyek nem tudnak áthatolni az ép sejtmembránokon. A korábbi irodalomban beszámoltak arról, hogy reverzibilis membránpermeabilizáció valósítható meg, ha alacsony dózisú TX100-at használnak.
A Digitonin visszafordítható?
A digitonin alacsony koncentrációja a plazmamembrán reverzibilis permeabilizációját idézte elő szarvasmarha-, egér- és sertés szomatikus sejtekben. ... Eredményeink azt sugallják, hogy a digitoninnal végzett reverzibilis permeabilizáció felhasználható nukleáris átprogramozás indukálására és pluripotens gének aktiválására sejtmentes rendszerben.
Hogyan rögzíted a sejteket?
Szerves oldószerekkel történő rögzítéshez használjon jéghideg metanolt, etanolt vagy etanol és metanol 1:1 arányú keverékét, hogy fedje le a fedőlemezek sejtjeit. Miután lefedte, inkubálja a sejteket a fagyasztóban (-20°C) 5-7 percig. Ne aggódjon amiatt, hogy ezen a ponton sterilen tartja sejtjeit – megöli őket!
A glutáraldehid átjárható?
Az intracelluláris antigének kimutatásához a sejteket először permeabilizálni kell , különösen a térhálósító szerekkel, például formaldehiddel és glutáraldehiddel történő rögzítés után. ... Mivel a szerves oldószerek a fehérjéket is koagulálják, egyszerre használhatók a sejtek rögzítésére és permeabilizálására.