Hogyan lehet izolálni a mononukleáris sejteket a perifériás vérből?
Pontszám: 4,4/5 ( 51 szavazat )A PBMC-k izolálásához PBS-sel hígított teljes vért óvatosan rétegeznek azonos térfogatú Ficoll-ra egy Falcon-csőben, és 30-40 percig centrifugálják 400-500 g-vel fékezés nélkül . Négy réteg képződik, amelyek mindegyike más-más sejttípust tartalmaz – a legfelső réteg plazmát tartalmaz, amely pipettával eltávolítható.
Mi a perifériás vér mononukleáris sejtje?
A perifériás vér mononukleáris sejtek (PBMC) kerek sejtmaggal rendelkező vérsejtek, például monociták, limfociták és makrofágok . A legtöbb intracelluláris immunszuppresszáns kvantifikációs módszer első lépéseként mononukleáris sejteket izolálnak a perifériás vérből.
Hogyan lehet izolálni a mononukleáris sejteket a teljes vérből sűrűséggradiens centrifugálással?
Finoman rétegezze a hígított vért a sűrűséggradiens közeg tetejére. Ügyeljen arra, hogy ne keverje össze a két réteget. Centrifugáljon 800 xg-vel 20-30 percig, kikapcsolt fék mellett. Óvatosan gyűjtse be a sejteket úgy, hogy a pipettát közvetlenül a felső plazmarétegen keresztül a határfelületen lévő mononukleáris sejtekhez szúrja be.
Hogyan izolálhatja a monocitákat a PBMC-ből?
A legjobb a mágneses gyöngyök szigetelése . A monocitákat azonban tapadással izolálhatja. Tegyünk PBMC-t (RPMI + 5% FBS-ben vagy humán autológ szérumban) műanyagra 1 órára, majd mossuk többször a nem tapadó limfocitákat (gyűjtsük, centrifugáljuk stb.). A monociták a műanyaghoz tapadnak.
Hogyan kell vért gyűjteni a PBMC izolálásához?
Rutinszerűen elválasztjuk a PBMC-ket a teljes vértől 4,5 ml PBS-ben hígított vér felhasználásával, és 3 ml Lonza limfocita elválasztó táptalajra (LSM) rétegezzük. Corning LSM használata esetén a 4:3 arány jobban működik. Ezután 400 g-on 20 percig centrifugáljuk (a fék kikapcsolva), és összegyűjtjük a PBMC réteget.
Perifériás vér mononukleáris sejt (PBMC) feldolgozása
Hogyan izolálják a vérsejteket?
- Végezzen sűrűséggradiens centrifugálást, majd ammónium-klorid lízist. ...
- Közvetlenül izolálja a granulocitákat a vérből, lízis vagy sűrűségcentrifugálás nélkül, az EasySep™ Direct sejtizolációs technológiával.
Hogyan tisztíthatom meg a PBMC-t?
- Tisztítsa meg a vércsöveket 70%-os etanollal, és vigye át a vért egy 50 ml-es csőbe BSL2 védőburkolatban.
- Hígítsa fel a vért 1:1 arányban PBS-ben, és óvatosan keverje össze.
- A centrifugálás befejezése után vegye ki a mintákat a centrifugából, hogy elkerülje a fáziskeveredést.
Mennyi ideig élnek a monociták a kultúrában?
A sejtek életképességének jelentős növekedése 7 napig volt megfigyelhető. Következésképpen ez az időtartam tűnik a legalkalmasabbnak humán primer monociták tenyésztésére. Fő érdeklődésünk a sejttenyésztési körülmények optimalizálása, és különösen a sejtszám növelése volt.
Hogyan lehet a perifériás vérből mononukleáris sejteket szerezni?
Ezek a sejtek kinyerhetők a teljes vérből ficoll segítségével, amely egy hidrofil poliszacharid, amely elválasztja a vérrétegeket, és gradiens centrifugálással, amely a vért egy felső plazmarétegre választja el, amelyet egy PBMC-réteg és egy polimorfonukleáris sejtek alsó frakciója követ. mint a neutrofilek és...
Hogyan izolálják a limfocitákat?
A limfociták izolálásához teljes vért rétegeznek egy körülbelül 1,077 g/ml sűrűségű gradiens táptalajra . Ilyen sűrűségű táptalaj használatával az összes mononukleáris sejt (limfociták és monociták) izolálható1 .
Mi az a Ficoll gradiens?
A Ficoll 400 egy erősen elágazó polimer, amely szacharóz és epiklórhidrin kopolimerizációjával képződik. ... A Ficoll 400 leggyakoribb alkalmazása sűrűséggradiens közegként eukarióta sejtek, organellumok és baktériumsejtek elválasztására és izolálására. Akár 1,2 g/ml sűrűség is elérhető.
Hogyan lehet izolálni a PBMC-t az egérvérből?
Limfociták izolálása egérvérből, mivel ezeket nem nevezik PBMC-knek az egérvérből. Elsőként egy Ficoll Paque PREMIUM-ot kell használni 1,084 sűrűséggradienssel , amely alkalmas humán PBMC-k, valamint egér limfociták izolálására. Hígítsa fel a vért 4-szer D-PBS-ben. Rétegesítse Ficollra, majd centrifugálja.
Mi a különbség a Percoll és a Ficoll között?
A Percoll egy kolloid szilícium-dioxid, amelyet egyrétegű polivinil-pirrolidon borít. A Ficoll szacharóz és epiklórhidrin dendrimer kopolimerje. Mindkettő jó, mivel a szacharóz sűrűség gradienséhez képest minimális ozmolális .
Miért fontos a perifériás vér mononukleáris sejtjeinek izolálása?
A polimorfonukleáris sejtek tovább izolálhatók a vörösvértestek lízisével. A PBMC-ket széles körben használják kutatási és toxikológiai alkalmazásokban. ... Ezért nagyon fontos a perifériás vérből származó PBMC-k elérhetősége az új gyógyszerek vagy kémiai vegyületek toxicitását vizsgáló kutatók számára.
Honnan származik a perifériás vér?
A perifériás vér az a folyadék, amely a szíven, az artériákon, a kapillárisokon és a vénákon keresztül halad .
Mi a különbség a teljes vér és a perifériás vér között?
A perifériás vér a szervezetben áramló, keringő vér. Vörösvértestekből, leukocitákból és trombocitákból áll. ... A perifériás vér különbözik attól a vértől, amelynek keringése a májban, a lépben, a csontvelőben és a nyirokrendszerben van . Ezek a területek saját speciális vért tartalmaznak.
Melyek a mononukleáris sejtek típusai?
15.1 Eredet. A humán perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) a perifériás vérből izolálják, és bármely kerek sejtmaggal rendelkező vérsejtként azonosítják (azaz limfociták , monociták, természetes ölősejtek (NK-sejtek) vagy dendritikus sejtek).
Mi az a mononukleáris gyulladás?
Absztrakt. A krónikus gyulladásos reakcióra jellemző mononukleáris sejt infiltráció a limfociták és monociták vándorlásából ered a posztkapilláris venula endotéliumán keresztül. Ezeknek a sejteknek a kivándorlásának kezdeti lépése a vaszkuláris endotéliumhoz való kötődésükben.
Mit jelent az alacsony mononukleáris sejtszám?
A monociták alacsony szintje általában olyan egészségügyi állapotok következtében alakul ki, amelyek csökkentik az általános fehérvérsejtszámot, vagy olyan rákkezelések és más súlyos betegségek következtében, amelyek elnyomják az immunrendszert. Az alacsony abszolút monocitaszám okai a következők: kemoterápia és sugárterápia, amelyek károsíthatják a csontvelőt.
Mi történik, ha a monociták száma magas?
Ha a monocita szintje magas – ezt monocitózisnak nevezik –, az azt jelenti, hogy a szervezet küzd valamivel. Néhány állapot, amely a monociták számának növekedését okozhatja a vérében, a következők: vírusfertőzések , például fertőző mononukleózis, mumpsz és kanyaró. parazita fertőzések.
A monociták gyulladást okoznak?
A monociták toborzása a gyulladás helyére kritikus fontosságú a gazdaszervezet védelmében. A gyulladás során a monociták a vérben keringenek, és a leukocita toborzási kaszkád általános paradigmája után a gyulladt szövetekbe extravazálódnak , ami gördülést, adhéziót és transzmigrációt foglal magában.
Amikor a monociták a vérből a vérbe vándorolnak, akkor ezeket nevezik?
A monociták viszonylag hosszú ideig maradnak a keringésben, a felezési idő 17 óra (egereknél) 71 óráig (embereknél). Ezután véletlenszerűen elhagyják ezt a rekeszt a diapedézisnek nevezett folyamat révén (lásd alább), és a szövetekbe és testüregekbe vándorolnak, ahol makrofágokká differenciálódnak .
Hogyan lehet elkülöníteni a vérkomponenseket?
A centrifugának nevezett gép megforgatja a vért, hogy elválassza a vörösvértesteket, a vérlemezkéket és a plazmát. Ahogy a vér elválik, a nehezebb vörösvértestek lesüllyednek az aljára, és visszaadják Önnek.
Hogyan lehet megszabadulni a vörösvértestektől a teljes vérben?
Az eritrocitaferézis egy aferézis eljárás, amellyel az eritrocitákat (vörösvértesteket) elválasztják a teljes vértől. Ez egy olyan extrakorporális vérleválasztási módszer, amellyel a donorból vagy betegből teljes vért vonnak ki, a vörösvértesteket elválasztják, és a megmaradt vért visszavezetik a keringésbe.
Hogyan lehet elkülöníteni a PBMC-t a buffy coat-tól?
A buffy coat alapos lemosása fontos a vérlemezkék szennyeződésének csökkentése érdekében. Teljes vér esetén 2-3 mosás általában elegendő. 4.2. Új steril kúpos csöve(ke)t címkézzen fel, ugyanannyi és ugyanannyi térfogatú, mint a sűrűséggradiens sejtelválasztásnál, amely a PBMC-ket tartalmazza.