Hogyan lehet kiegyenlíteni a hplc oszlopot?
Pontszám: 4,2/5 ( 75 szavazat )Az egyensúlyozási idő az oszlop áramlási sebességétől és méretétől függ. Általában az oszlop átöblítése tíz-húsz oszloptérfogattal elegendő az egyensúly megteremtéséhez. Ezért az áramlási sebességet szem előtt kell tartani.
Mennyi ideig tart egy oszlop kiegyensúlyozása?
Míg a hüvelykujjszabály az, hogy 10 oszloptérfogat mozgófázis elegendő az oszlop egyensúlyba hozásához, amikor víz vagy puffer és acetonitril vagy metanol keverékéről váltunk, az ionpárosítási feltételek kiegyenlítéséhez 20-50 oszloptérfogat vagy több is lehet. .
Hogyan öblíthetek ki egy új HPLC oszlopot?
Az Ön esetében mossa le az oszlopot 70%-os vízzel; 15% metanol; 15% acetonitril. Tekerje az oszlop eluenst a hulladékba, hogy ne szennyezze be a detektor(oka)t. Mossuk át lassan az oszlopot 100%-os metanollal , és mossuk legalább 15 percig. Mossuk át az oszlopot 100%-os acetonitrilre, és mossuk legalább 15 percig.
Hogyan kell kiszámítani egy oszlop térfogatát?
- Használja Volume = pi x sugár 2 x hossz.
- pi = 3,14.
- r 2 és Length értékét centiméterre kell váltani.
- Az oszlop átmérője osztva 2-vel = sugár.
- sugár x sugár = r 2
- 3,14 xr 2 x L = térfogat cm 3 -ben
- cm3 = 1 ml.
Mi a térfogati képlet?
Míg a téglalap alakú terület alapképlete a hosszúság × szélesség, a térfogat alapképlete a hosszúság × szélesség × magasság .
LC oszlop kondicionálása
Mi az oszlop teljes térfogata?
A (teljes) oszloptérfogat megegyezik a lehető legkésőbbi retenciós idővel (kivéve azokat a dolgokat, amelyek a csapadék stb. miatt ráragadnak a tetejére).
Hogyan szüntethetem meg az elakadást a HPLC-ben?
Re: HPLC csőelzáródás Megpróbálhatja megfordítani a csövet, és 100%-os vízzel öblíteni . Kezdje nagy áramlási sebességgel (5 ml/perc) 10-15 másodpercig, és ellenőrizze a rendszer nyomását. Ha a rendszer nyomása fokozatosan csökken, az azt jelenti, hogy a cső elülső része eltömődött.
Hogyan oldhatok fel egy oszlop blokkolását a HPLC-ben?
Először is mossa le az oszlopot különböző oldószerekkel, alacsony áramlási sebességgel. Ha azonban az oszlop annyira eltömődött, hogy egyáltalán nem tud folyni, fordítsa meg az oszlopot, és futtassa az ellenkező irányba. Ha minden más nem sikerül, akkor szükség lehet egy új oszlopra. Ahogy korábban mondtam, az oszlopoknak véges életük van.
Hogyan tisztíts meg egy oszlopot?
Távolítsa el a puffert, sót vagy savat az oszlopról: Mossa az oszlopot az aktuális mozgófázissal puffer, só vagy sav nélkül 10-15 percig. Ha a szerves oldószer és a víz arányát megváltoztatjuk, só kicsapódhat.
Hogyan válasszak ki egy oszlopot a HPLC-ben?
Válasszon kis pórusméretű (60-80Å) oszloptömítést , ha az oldott anyag molekulatömege körülbelül 2000-4000 Daltonnál kisebb. Ellenkező esetben használjon 300Å pórusméretű oszloptömítést. Az 1. és 2. ábra a pórusméretnek a csúcsszélességre és a mintaterhelésre gyakorolt hatását mutatja.
Hogyan lehet egy oszlopot kiegyenlíteni?
Az egyensúlyozási idő az oszlop áramlási sebességétől és méretétől függ . Általában az oszlop átöblítése tíz-húsz oszloptérfogattal elegendő az egyensúly megteremtéséhez. Ezért az áramlási sebességet szem előtt kell tartani.
Mit jelent az oszlop kiegyensúlyozása?
Oszlopkiegyenlítés A kérdéses fehérjével és a választott gyantával kompatibilis puffert engedünk át az oszlopon . Általános gyakorlat az, hogy az oszlopot 5–10 oszloptérfogatnyi (CV) egyensúlyozó pufferrel egyensúlyozzák ki.
Mi az az egyensúlyi idő?
Az egyensúlyi idő az autokláv azon képességét jelzi, hogy képes-e eltávolítani a levegőt az autoklávkamrában elhelyezett szárazáru-terhelésről, majd ezt követően sterilizálni . Ezért az egyensúlyi idő az autokláv teljesítményének mutatója.
Hogyan lehet újra létrehozni egy oszlopot?
- Csatlakoztassa le az oszlopot, és csatlakoztassa újra a rendszerhez úgy, hogy az oszlopon átfolyó áramlás fordított irányban haladjon. ...
- Öblítse ki a sókat/puffereket HPLC minőségű vízzel. ...
- Öblítse át az oszlopot 25 ml izopropanollal.
- Öblítse át az oszlopot 25 ml metilén-kloriddal.
Hogyan lehet regenerálni egy C18 oszlopot?
- Csatlakoztassa le az oszlopot a detektorról, és öntse a mosóoldószereket egy főzőpohárba.
- Kezdje a puffersók (víz/szerves) nélküli mobil fázisával. ...
- Ezután használjon 100%-ban szerves anyagot (metanolt vagy acetonitrilt).
- Ellenőrizze a nyomást, hogy visszaállt-e a normál értékre; ha nem, akkor:
Mi az az őroszlop?
A védőoszlop az injektor és az analitikai oszlop közé helyezett védőoszlop vagy patron . Arra szolgál, hogy eltávolítsa a szennyeződéseket és a lebegő szilárd anyagokat az analitikai oszlopba jutásból. Általában körülbelül 2 cm hosszú és 4,6 mm belső átmérőjű.
Mi lehet a hiba a HPLC-ben?
- Az oszlop szárazon futtatása. Ez a legrosszabb dolog, amit tehetsz! ...
- Maró vegyszerek használata. ...
- Nem oldja fel teljesen a mintát. ...
- Nem tisztítja az oszlopot minden használat után.
Mi az oka az RSD meghibásodásának a HPLC-ben?
Oszlophőmérséklet-ingadozások (különösen az ioncserélő rendszerekben). Oszlop túlterhelés. (A retenciós idő általában csökken, ha az oszlopra injektált oldott anyag tömege meghaladja az oszlop kapacitását.) A minta oldószere nem kompatibilis a mozgófázissal .
Mi okozza a nyomásesést a HPLC-ben?
A folyamatosan túl alacsony nyomás egy kis szivárgás vagy légbuborékok jele lehet a szivattyúrendszerben. Ne felejtse el a nyilvánvaló okokat, mint például a túl alacsony áramlási sebesség vagy az eltérő oszlophőmérséklet. Még az oldószerpalackban lévő eltömődött szívószűrő is csökkentheti a nyomást.
Mi az oszlopágy?
Az iparban a töltött oszlop az elválasztási folyamatok, például abszorpció, sztrippelés és desztilláció végrehajtására használt töltött ágy típusa. A töltött oszlop egy olyan nyomástartó edény, amelynek van egy töltött szakasza .
Miért számítjuk ki az üres térfogatot?
A HPLC oszlop üres térfogata és az áramlási sebesség hasznos az oszlop üres idejeként ismert érték kiszámításához, más néven to. Ennek az értéknek az ismerete segíthet más kritikus kromatográfiás értékek, például a vegyület felbontásának és elválasztási tényezőjének meghatározásában .
Mekkora az oszlopkromatográfia mérete?
A 4 és 12 µm közötti mérettartomány hagyományosan az analitikai SEC gyanták szabványa. A tendencia azonban a kisebb, 2 µm-nél kisebb részecskék felé irányul, az ultra-nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (UHPLC) rendszerek használatával a még gyorsabb elválasztás érdekében nagy áteresztőképességű módban.