1. 1. lépés – Használjon kiváló minőségű szakaszokat. ...
2. 2. lépés – Biztosítsa az optimális rögzítést. ...
3. 3. lépés – Kerülje el a szakasztapadási problémákat. ...
4. 4. lépés – Kerülje a koncentráció-gradienseket. ...
5. 5. lépés – Gondosan válassza ki az antitestet. ...
6. 6. lépés – Olvassa el a specifikációs lapokat. ...
7. 7. lépés – Optimalizálja a visszakeresési módszereket. ...
8. 8. lépés – Fontolja meg az antitestek keresztreaktivitását.

• A szövetek előkészítése. ...
• Szövetrögzítés. ...
• Végezzen hő- vagy enzimindukált antigén-visszakeresést. ...
• Az endogén peroxidázok, foszfatázok és biotin blokkolása. ...
• Blokkolja a nem specifikus kötőhelyeket. ...
• Értsd meg az antitestedet. ...
• Válassza ki a megfelelő észlelési rendszert. ...
• Válassza ki a kromogénjét.

Mik az immunhisztokémia hátrányai?

Hogyan javíthatom az immunfestésemet?

Az antitesthígítás beállításával javítható a festés. Általában 1 μg/ml tisztított antitest vagy 1:100–1:1000 antiszérum elegendő a specifikus festődés eléréséhez. Mindig lehetőség van a jel intenzitásának növelésére, amíg a háttér alacsony marad.

Hogyan növelhetem az IHC-t?

A nem specifikus kötődés csökkentése érdekében próbáljon 1) kevesebb elsődleges és/vagy másodlagos Ab-t, 2) több szérumot a blokkban , 3) hosszabb blokkidőtartamot, 4) több mosószert a mosásnál, 5) hosszabb mosási időt.

Mit mutathat ki az immunhisztokémia?

Az immunhisztokémia (IHC) a monoklonális és poliklonális antitestek fontos alkalmazása az egészség és betegség szempontjából fontos antigén szöveti eloszlásának meghatározására . Az IHC-t széles körben használják rákos megbetegedések diagnosztizálására; specifikus tumorantigének de novo expresszálódnak, vagy bizonyos rákos megbetegedések esetén fokozottan szabályozódnak.

Mennyibe kerül az immunhisztokémia?

Az immunhisztokémiai teszt 250 dollárba kerülne, feltételezve, hogy antitestenként 50 dollár. Ha 10%-kal nő a diagnosztikai bizonyosság, akkor a költség-hatékonysági arány 25 dollár (a diagnosztikai bizonyosság százalékos nyereségére jutó költség = vizsgálati költség/növekedés a diagnosztikai bizonyosságban = 250 dollár/10%).

Mennyi ideig tart az immunhisztokémia elkészítése?

Emiatt általában körülbelül 3 hét kell az eredmények eléréséhez.

Mit jelent az IHC pozitív?

A pozitív vizsgálati eredmény azt jelenti, hogy a laboratórium meghatározott változást talált a daganat fehérjéiben. Ez azt jelenti, hogy lehetséges, hogy öröklött genetikai állapota van, és további genetikai vizsgálat javasolt.

Mik azok az IHC markerek?

Az immunhisztokémiai tumormarkerek olyan fehérjék, amelyek segítenek az orvosoknak különbséget tenni a különböző ráktípusok között . A mesotheliomához kapcsolódó fehérjék, mint például a kalretinin, a WT-1 és a podoplanin, segítenek a patológusoknak megkülönböztetni a mesotheliomát más rákoktól, például a tüdőráktól.

Mi az immunhisztokémiai elemzés?

Az immunhisztokémiai (IHC) analízis egy módszer a fehérjék jelenlétének és elhelyezkedésének kimutatására a szövetmetszetekben . Bár mennyiségileg kevésbé érzékeny, mint az immunológiai vizsgálatok, mint például a Western blot vagy az ELISA, lehetővé teszi a folyamatok megfigyelését ép szövettel összefüggésben.

Mit jelent az IHC?

Az IHC az immunhisztokémiát jelenti. Az immunhisztokémia egy speciális vizsgálat, amelyet a patológusok végeznek szöveteken, hogy segítsék őket a diagnózis felállításában. Az immunhisztokémia lehetővé teszi a patológusok számára, hogy kiemeljék a sejtcsoportokat a sejtek által termelt vegyszerek alapján.

Mi okozza az IHC magas hátterét?

ha nagyon magas koncentrációjú primer vagy másodlagos antitestet használ, az növeli a háttérfestődést . A blokkolás időtartamát szobahőmérsékleten 2 órára vagy 4 fokos éjszakára növelheti.

Hogyan hígítjuk az IHC antitesteket?

Hasonlóan az IHC-hez, ha az adatlap 1:200 -as hígítást javasol, akkor javasolt 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 és 1:500 hígítást készíteni. Minden hígítást ugyanazon a mintatípuson kell elvégezni az azonos kísérleti feltételek megőrzése érdekében.

Mi az immuncitokémiai festés?

Az immuncitokémia (ICC) egy technika a fehérjék vagy más antigének kimutatására és megjelenítésére sejtekben, olyan antitestek felhasználásával, amelyek specifikusan felismerik a kívánt célpontot. ... Az ICC-ben a festési technikát tenyésztett sejteken vagy egyedi sejteken alkalmazzák, amelyeket pl.

Hogyan optimalizálja az antitesteket?

Általában az antitest-koncentrációt változtatják, miközben állandó inkubációs időt és hőmérsékletet tartanak fenn a festés optimalizálása érdekében. Hosszabb inkubációs idő is alkalmazható annak biztosítására, hogy az antitest behatoljon a szövetbe. Hosszabb inkubációs idő kombinálható alacsonyabb hőmérséklettel a specifikus kötődés elősegítése érdekében.

Hogyan növelhetem az immunfluoreszcens jelemet?

A jel fokozható, ha enzim- vagy fluorofor-konjugált antitestről biotinilált másodlagos antitestre, majd enzim- vagy fluorofor-konjugált sztreptavidinre váltunk. Egyes fluoroforok fényesebbek, mint mások, így a FITC-konjugátumról az Alexa Fluor® 488-ra váltás szintén növeli a jelet.

Mi van, ha festés?

Az immunfluoreszcens (IF) festés széles körben alkalmazott technika a biológiai kutatásokban és a klinikai diagnosztikában. Az IF fluoreszcensen jelölt antitesteket használ a specifikus célantigének kimutatására . Ezt követi a képalkotás, ez egy nagyon közvetlen technika, mivel valóban láthat valamit.

Mi az a DAB kromogén?

Termékleírás. A 3,3'-Diaminobenzidin (DAB) egy széles körben használt kromogén immunhisztokémiai festéshez és immunblothoz. Peroxidáz enzim jelenlétében a DAB barna csapadékot termel, amely alkoholban és xilolban oldhatatlan.

Mi a kromogén kimutatás?

Az IHC kromogén kimutatási módszerei olyan enzimeken alapulnak, amelyek az oldható szubsztrátokat oldhatatlan, kromogén termékekké alakítják . Ezek az enzimek jellemzően másodlagos antitestekhez kapcsolódnak, amelyek a kérdéses fehérje elleni elsődleges antitesthez kötődnek.

Mi a negatív kontroll célja az immunhisztokémiában?

Negatív kontrollok A negatív kontrollok célja annak bemutatása, hogy a megjelenített reakció a célmolekula epitópjának és az antitest/affinitási reagens paratópjának kölcsönhatásának köszönhető .

Hogyan számítják ki az IHC pontszámot?

A pontszámot a következő képlettel kapjuk meg: 3 x erősen festődő magok százaléka + 2 x mérsékelten festődő magok százaléka + gyengén festődő magok százaléka , ami 0 és 300 közötti tartományt ad.