Hogyan működik a renilla luciferáz?
Pontszám: 4,6/5 ( 23 szavazat )A renilla luciferáz, egy 36 kDa-os monomer fehérje katalizálja a koelenterát-luciferin (coelenterazin) oxidációját, és fényt állít elő (3; 1. ábra). Az enzim aktivitásához nincs szükség poszttranszlációs módosításra, és az enzim közvetlenül a transzlációt követően genetikai riporterként funkcionálhat.
Mit csinál a Renilla luciferáz?
A renilla luciferáz egy enzim, amely katalizálja azt a kémiai reakciót, amely felelős a Renilla reniformis, a tengeri árvácskaként is ismert lágy korall zöld biolumineszcenciájáért, és az Anthozoa osztály tagja [1].
Hogyan működik a luciferáz teszt?
A luciferáz vizsgálat hasznos annak vizsgálatára, hogy egy adott fehérje szabályoz-e egy adott gént a transzkripció szintjén . ... Amikor ez a fehérje aktiválja a transzkripciót, a sejt luciferáz enzimet termel. A lízispuffer és a szubsztrát hozzáadása után egy luminométer számszerűsíti a luciferáz aktivitást.
Hogyan működik a Gaussia luciferáz?
A Gaussia luciferáz expresszálható emlőssejtekben a kereskedelemben kapható riporterplazmidok felhasználásával. Ez a luciferáz, amely nem igényel ATP-t, katalizálja a coelenterazin szubsztrát oxidációját egy fényt kibocsátó reakcióban (470 nm-en), és jelentős előnyökkel rendelkezik a többi riportergénhez képest.
Hogyan működik a gén luciferáz, hogyan termel fényt?
A luciferáz egy enzim. Az enzim egy vegyi anyag (úgynevezett katalizátor), amely kölcsönhatásba lép a szubsztrátummal, hogy befolyásolja a kémiai reakció sebességét. A luciferáz és az oxidált (oxigén hozzáadott) luciferin kölcsönhatása mellékterméket hoz létre, az úgynevezett oxiluciferint. Ennél is fontosabb, hogy a kémiai reakció fényt hoz létre .
Bevezetés a Reporter Gene Assays-be
Nyomon követhető a luciferáz?
Ez azért izgalmas, mert a luciferáz lumineszcenciájának változásai nyomon követhetők az egyes egerekben (több időpontban, pl. órákban, napokban vagy hetekben történő méréssel), lehetővé téve a dinamikus biológiai folyamatok (például terhesség vagy bakteriális fertőzés) pontos nyomon követését, és elkerülhető a számos egeret kell elaltatni...
Hogyan lehet kimutatni a luciferázt?
A luciferáz gének szintetizálhatók és beépíthetők szervezetekbe vagy transzfektálhatók sejtekbe. ... A luciferáz reakcióban fény bocsát ki, amikor a luciferáz a megfelelő luciferin szubsztrátra hat . A fotonkibocsátás fényérzékeny készülékekkel, például luminométerrel vagy módosított optikai mikroszkóppal érzékelhető.
Mi az a szentjánosbogár-luciferáz vizsgálat?
A Firefly/Renilla Dual Luciferase Assay (SCT152) lehetővé teszi a Firefly és Renilla luciferáz aktivitásának mérését ugyanabban a mintában, nagy érzékenységgel és linearitással. ... Ez egy flash típusú vizsgálat , amelyhez a luciferáz mintához való detektorreagensek hozzáadása után azonnal meg kell mérni a lumineszcenciát.
Hogyan gátolt a Firefly fényreakciója?
1.3 Hogyan gátolja a fényreakciót a szentjánosbogárban? ... A luciferáz nem katalizálja a reakciót .
A luciferáz marker?
A kinetikai elemzések azt mutatták, hogy a luciferáz aktivitás már a fertőzés után 90 perccel kimutatható volt. A luciferáz expresszióját sejtkivonatokban luminométerrel lehetett nyomon követni. ... Egereken végzett kinetikai kísérletek bebizonyították, hogy a luciferáz kiváló marker a herpeszvírus állatokban való terjedésének követésére.
Mi a luciferin öt típusa?
- Szentjánosbogár.
- Csiga.
- Bakteriális.
- Coelenterazin.
- Dinoflagellát.
- Vargulin.
- Gombák.
Mennyi ideig tart a luciferáz?
A flash kinetikájú luciferáz enzimek maximális érzékenységgel rendelkeznek a nagy jelintenzitás miatt, bár a kibocsátott fény is gyorsan csökken. Ezzel szemben a ragyogási kinetikával rendelkező enzimek kevésbé érzékenyek, de legalább 60 percig stabilan bocsátanak ki fényt.
Milyen színű a luciferáz?
A szentjánosbogarak lumineszcenciájáért felelős enzim különféle formái – a luciferáz – kissé eltérő színeket képesek előállítani, a vöröstől a sárgán át a zöldig .
A luciferáz szubsztrátja?
D-Luciferin, nátriumsó A D-Luciferin a szentjánosbogár-luciferáz enzim szubsztrátja.
Hol található a luciferáz?
A luciferáz egy fénytermelő enzim, amely természetesen megtalálható a szentjánosbogarakban és a világító tengeri és szárazföldi mikroorganizmusokban .
Miért világítanak a szentjánosbogarak éjszakai kémiai reakció során?
A szentjánosbogarak testükön belül kémiai reakciót váltanak ki, amelynek hatására fényt bocsátanak ki . Ezt a fajta fénykibocsátást biolumineszcenciának nevezik. A luciferáz nevű enzim jelenlétében az oxigén kölcsönhatásba lép a kalciummal, az ATP-vel és a luciferinnel, és ez biolumineszcenciát eredményez.
Mi a kémiai reakció a szentjánosbogárban?
A szentjánosbogár fénye egy kémiai reakció, amelyet egy szerves vegyület okoz a hasában. A vegyületet luciferinnek hívják. Ahogy a levegő beáramlik a szentjánosbogár hasába, reakcióba lép a luciferinnel. Kémiai reakciót vált ki, amely a szentjánosbogár ismerős fényét kelti.
Hogyan készíti a szentjánosbogár a luciferázt?
A szentjánosbogár-luciferáz többlépcsős folyamat során fényt állít elő a luciferinből . Először is, a D-luciferint MgATP adenilezi, és luciferil-adenilátot és pirofoszfátot képez. Az ATP-vel történő aktiválás után a luciferil-adenilátot molekuláris oxigén oxidálja, és dioxetanongyűrűt képez.
Mennyi ideig tart a luciferáz vizsgálat?
Ha a fehérje csökkenti a transzkripciót, a sejtek a normálisnál kevesebb luciferázt expresszálnak. A tudós a luciferáz expresszióját vizsgálja körülbelül 2-3 nappal a kezdeti sejttranszfekció után .
Ki találta fel a luciferázt?
Robert Boyle ( 1627-1691 ) A 18. század fontos, kapcsolódó felfedezései. A luciferin és a luciferáz felfedezése, Raphaël Dubois .
Hogyan gyorsítja fel a luciferáz a kémiai reakciót?
A luciferáz a luciferin nevű vegyi anyaghoz kötődik. Miután megkötődött, a luciferáz enzim felgyorsítja azt a kémiai reakciót, amely egy oxigénmolekulát és luciferint egyesít, és így oxiluciferint állít elő . Ez a reakció energiát igényel és fényt bocsát ki. ... A luciferáz csökkenti a reakció megindulásához szükséges energia mennyiségét.
A luciferáz zavarja a GFP-t?
Ha megbizonyosodik arról, hogy megfelelő kontrollplazmidot használ (a GFP-t expresszálja, de nem az Ön érdeklődésére számot tartó génjét), akkor ezt a plazmidot megfelelőnek kell lennie a túlzott expresszióhoz. ... A mi kezünkben nem volt különbség a luciferáz adatok között sem a GFP-vel jelölt, sem a címkézetlen vektorokat használva a számunkra érdekes fehérje túlzott expressziójára.
Mi az a bogár luciferáz?
Minden bogárluciferáz közös ősből fejlődött ki: mindegyik ATP-t, 02-t és egy közös luciferint használ szubsztrátként. ... Ezek az újonnan szerzett luciferázok legalább négy különböző típusúak, amelyek megkülönböztethetők attól, hogy képesek különböző színű biolumineszcenciát bocsátani a zöldtől a narancssárgáig .
Mi az a luminométer?
A luminométer egy olyan műszer, amely fénysokszorozó cső segítségével méri a mintából származó látható fény gyenge kibocsátását . ... A fénymérő szintén tág fogalom, de általában a fotózásban a környezeti fény mérésére használt kis eszközre utal.
Hogyan teszteli a biolumineszcenciát?
A biolumineszcens képalkotás a luciferáz enzim és a szubsztrát kémiai reakcióját követően kibocsátott fény érzékeny detektálásával valósul meg. A legtöbb képalkotó rendszer kétdimenziós (2D) információt szolgáltat rágcsálókban, és álszínes skálázásban mutatja meg az állat által kibocsátott fény helyét és intenzitását.