A hoechst 33342 megfesti az elhalt sejteket?
Pontszám: 4,2/5 ( 29 szavazat )Igen, a Hoechst 33342 képes megfesteni az elhalt sejteket , azonban a Hoechst 33358 a legelőnyösebb festék, amelyet az elhalt vagy rögzített sejtek megfestésére használnak. A Hoechst 33342-t általában élő sejtek festésére használják. A Hoechst festékek fluoreszcens foltok, amelyek a DNS kisebb ligetének AT-ben gazdag régióihoz kötődnek.
A Hoechst 33342 megfesti az élő sejteket?
A Hoechst 33342 egyik előnye, hogy membránáteresztő, így képes megfesteni az élő sejteket. A Hoechst 33342 a DNS adenin-timinben gazdag régióihoz kötődik a kisebb barázdában. A DNS-hez való kötődéskor a fluoreszcencia nagymértékben megnő.
Mit fest a Hoechst?
A Hoechst nem interkaláló festékek, amelyek megkötik a DNS kisebb barázdáját az A-T-ben gazdag régiókban (1b. ábra). A Hoechst festékek mind az élő, mind a rögzített sejtek DNS-ét megfestik, és kompatibilisek az immunhisztokémiai alkalmazásokkal.
A Hoechst mérgező a sejtekre?
A DNS-hez kötődő festékeket, például a Hoechst 33342-t általában használják a kromatin élő sejtekben fluoreszcens mikroszkóppal történő megjelenítésére. Figyelmeztetés az, hogy maguk a szondák nem zavarhatják meg a sejtválaszokat, és normál körülmények között a festékek általában nem mérgezőek .
Milyen festéket használnak az elhalt sejtek festésére?
A tripánkék olyan festék, amelyet az élő sejtek mennyiségi meghatározására használnak, kizárólag az elhalt sejtek jelölésével. Mivel az élő sejteknek ép sejtmembránja van, a tripánkék nem tud áthatolni az élő sejtek sejtmembránján és bejutni a citoplazmába. Egy elhalt sejtben a tripánkék átjut a porózus sejtmembránon, és bejut a citoplazmába.
PureBlu™ Hoechst 33342 nukleáris festőfesték élő sejtekhez – Gyors megközelítés a sejtmagfestéshez
Miért festődnek a sejtek?
A sejtek megfestésének legalapvetőbb oka a sejt vagy bizonyos sejtkomponensek mikroszkóp alatti láthatóságának javítása . A sejteket az anyagcsere folyamatok kiemelése vagy az élő és elhalt sejtek közötti különbségtétel érdekében is meg lehet festeni.
Milyen színűre festődik a DNS?
A leggyakrabban használt fluoreszcens DNS-festék az etidium-bromid (EtBr). Az egyes EtBr-molekulák összepréselhetik a szomszédos bázispárokat a DNS-kettős hélixben az „interkalációnak” nevezett folyamat során. UV fénnyel gerjesztve a DNS-be interkalált EtBr fluoreszkál, és élénk narancssárga fényt bocsát ki .
A DAPI megfesti az apoptotikus sejteket?
Mivel az apoptotikus sejtmembrán sérül, több DAPI kerül a sejtbe, és erősebb kék színűvé válik . Az apoptotikus sejtek eltérő nukleáris morfológiája, például a kromoszóma kondenzációja és fragmentációja szintén segít a DAPI-val festett apoptotikus sejtek vizuális azonosításában.
A DAPI megfesti az élő sejteket?
A DAPI-t általában a rögzített sejtek megfestésére használják, mivel a festék a sejteket át nem eresztő, bár a festék bejut az élő sejtekbe, ha magasabb koncentrációban használják . Élősejtes festéshez a Hoechst 33342 festék egy népszerű sejtáteresztő nukleáris ellenfesték.
A Hoechst DAPI?
A Hoechst festékeket gyakran használják egy másik, DAPI nevű nukleinsavfestés helyettesítésére. A legfontosabb különbségek a Hoechst festékek és a DAPI között a következők: A Hoechst festékek kevésbé mérgezőek, mint a DAPI , ami biztosítja a festett sejtek életképességét. A Hoechst festékek további etilcsoportja sejtáteresztőbbé teszi őket.
Meg tudod javítani a sejteket a Hoechst festés után?
A Hoechst és a DAPI népszerű kék fluoreszcens, magspecifikus festékek, amelyek élő vagy rögzített sejtek megfestésére használhatók. ... A festés nagyon stabil és nem mérgező az élő sejtekre több napig vagy tovább. A DAPI és a Hoechst kisebb barázdás kötőfestékek; A DAPI-nak nagyobb affinitása van a DNS A/T-ben gazdag régióihoz, mint a G/C-ben gazdag DNS-hez.
Hogyan kell használni a Hoechst 33342-t?
- Tenyésztjük a sejteket megfelelő tápközegben és edényben fluoreszcens mikroszkópiához.
- Készítse elő a Hoechst festőoldatot úgy, hogy a Hoechst® törzsoldatot 1:2 000 arányban hígítja PBS-ben.
- Távolítsa el a közeget.
- Adjon hozzá annyi festőoldatot, hogy ellepje a sejteket.
- Inkubálja 5-10 percig, fénytől védve.
Mi a különbség a Hoechst és a DAPI között?
A Hoechst színezékeket jellemzően élő sejtek DNS-tartalmának festésére használják nagy sejtmembrán-permeabilitása miatt. A DAPI-t jellemzően fixált sejtek DNS-tartalmának festésére használják alacsony membránpermeabilitása miatt.
Permeabilizálnia kell a sejteket a Hoechst festéshez?
A Hoechst festékek sejtáteresztőek, így nincs szükség permeabilizálásukra a Hoechst festéshez.
Mennyi ideig tart a DAPI festés?
Hosszú távú tároláshoz a törzsoldatot aliquot részekre oszthatjuk és =–20°C-on tárolhatjuk. Rövid ideig tartó tároláshoz az oldat 2-6°C-on, fénytől védve tárolható. Megfelelő kezelés esetén a DAPI-megoldások legalább hat hónapig stabilak.
A DAPI megfesti a gliát?
A tenyésztett sejtek általában drámaian megváltoztatják külső alakjukat az izolálás után, így gyakran lehetetlen megkülönböztetni a neuronokat és a gliát. ... Így a kettős jelölésű sejtek neuronként azonosíthatók, a csak DAPI festést hordozó sejtek nem neuronálisak .
Elhaltak a rögzített sejtek?
A rögzítés és permeabilizálás alapjai De a rögzített és permeabilizált sejtek elhaltak , és elveszítjük a dinamikus biológiai folyamatok szemlélésének képességét.
Mit csinál a DAPI folt?
Egy egyszerűen használható fluoreszcens festék, a 4',6-diamidino-2-fenil-indol (DAPI), amely élő és rögzített sejtekben egyaránt megjeleníti a mag DNS-t. DAPI festést használtunk a sejtmagok számának meghatározására és a bruttó sejtmorfológia értékelésére .
Hogyan képzeli el az apoptózist?
Az apoptotikus sejteket ezután képalkotó technikákkal és áramlási citometriával lehet megjeleníteni és számszerűsíteni. A fluoreszcens festékekkel történő jelölés különféle képalkotó módszerek alkalmazását teszi lehetővé.
Hogyan figyeli meg az apoptózist?
Az apoptózist a foszfatidil-szerin plazmamembránon történő külsődésének mérésével mutatják ki, fluoreszcens jelöléssel ellátott annexin V segítségével . Ezenkívül áramlási citometria is használható a sejtméret változásainak meghatározására (Bortner és Cidlowski, 2001; Warnes és mtsai. 2011).
Mi az Annexin V festődés?
Az Annexin V festés általános módszer az apoptotikus sejtek kimutatására . A Thermo Fisher Scientific kiváló minőségű fluoreszcens annexin V konjugátumokat kínál önálló reagensként és különféle készletekben az áramlási citometriában és a szuszpenziós sejtek képalkotásában.
Hogyan festi meg az EtBr a DNS-t?
Az etidium-bromid egy DNS interkelátor, amely beépül a kettős hélix bázispárjai közötti térbe. Az etidium-bromid UV-abszorbancia maximummal rendelkezik 300 és 360 nm-en. ... Az etidium-bromiddal festett gélekben lévő sávok ultraibolya fényben fluoreszkálnak .
Melyik festést használják a DNS-hez?
Az etidium-bromid (EtBr) a legismertebb és leggyakrabban használt DNS-festék. Ez egy interkaláló szer, amely megköti a DNS-t, és UV fény hatására 20-szoros fluoreszcenciája van. Az EtBr a legolcsóbb DNS-festék, így számos kutatólaboratórium számára ideális választás.
Mennyi ideig tart a DNS-gél megfestése?
Futtassa a gélt 80-150 V feszültséggel, amíg a festékvonal körülbelül 75-80%-a lesz a gélben. A jellemző működési idő körülbelül 1-1,5 óra , a gélkoncentrációtól és a feszültségtől függően. Megjegyzés: A fekete negatív, a piros pozitív. A DNS negatív töltésű, és a pozitív elektróda felé fut.