Ki tudod eluálni a fehérjét?
Pontszám: 4,3/5 ( 52 szavazat )Ha a fehérje nem azonos méretű az antitestével, eluálhat 0,1 M glicinnel , pH 2-3, majd SEC (például superdex 200) segítségével elválaszthatja a kívánt fehérjét az antitesttől.
Mi a fehérje eluálása?
A fehérjéket növekvő mennyiségű szerves oldószer, például acetonitril gradiensével eluáljuk. A fehérjék hidrofóbitásuk szerint eluálódnak. HPLC-vel végzett tisztítás után a fehérje olyan oldatban van, amely csak illékony vegyületeket tartalmaz, és könnyen liofilizálható.
Miért alacsony a fehérjék pH-értéke?
Az alacsony pH-jú puffer használata a protein A-ból való eluáláshoz köztudottan hozzájárul a termék aggregációjához . Mégis, a bizonyítékok korlátozottabb halmaza azt sugallja, hogy az alacsony pH nem lehet az egyetlen oka az aggregációnak a protein A kromatográfiában, hanem a folyamat más aspektusai is jelentősen hozzájárulhatnak.
Hogyan történik az elúció?
Az analitikai és szerves kémiában az elúció az a folyamat, amikor egyik anyagot a másikból oldószeres mosással extraháljuk ; mint a betöltött ioncserélő gyanták mosásakor a befogott ionok eltávolítására. ... Miután az oldószermolekulák kiszorították az analitot, az analit kivehető az oszlopból elemzés céljából.
Hány antitestre van szüksége a Coip-hez?
A rutin Co-IP kísérletekhez az általam használt antitest nem több, mint 2 ug . (Az én készletemben 1,4-2,0 ug antitest elegendő 2500-5000 ug fehérjelizátum rögzítéséhez.) De ez továbbra is függ a mintáiban lévő célfehérjék expressziós szintjétől, ezért valószínűleg módosítania kell.