Immobilizált fémion-affinitáskromatográfiával?
Pontszám: 4,9/5 ( 41 szavazat )Az immobilizált fémaffinitás kromatográfia (IMAC) egy fehérjeleválasztási módszer, amely az oldatban lévő fehérjék és a szilárd hordozóhoz rögzített átmeneti fémionok közötti kölcsönhatáson alapul [1]. ... Ha az ilyen ligandumok elegendő számban vannak és hozzáférhetők, akkor a fehérje hatékonyan tisztítható komplex keverékből.
Hogyan működik az immobilizált fémaffinitás kromatográfia?
Az immobilizált fémaffinitáskromatográfia (IMAC) az affinitáskromatográfia egy speciális változata, ahol a fehérjéket vagy peptideket a fémionokhoz való affinitásuk szerint választják el, amelyeket kelátképzéssel egy oldhatatlan mátrixhoz rögzítettek .
Hogyan eluálódik általában a fehérje immobilizált fémion-kromatográfiában?
A célfehérje elúcióját (deszorpcióját) protonálással (alacsonyabb pH-jú vagy alacsonyabb pH-gradiensű elúciós pufferek alkalmazásával) és a fémion erősebb kelátképzővel (például EDTA-val) történő ligandumcserével érik el. ... A kétértékű ionokat, például a Fe 2 + , Co 2 + , Ni 2 + , Cu 2 + és Zn 2 + átmenetifémeket használják leggyakrabban.
Mi az a fémkelát affinitáskromatográfia?
A fémionokhoz affinitással rendelkező fehérjék és peptidek fémkelát affinitáskromatográfiával választhatók el. ... A kelátképző Sepharose-t, a fémkelát-affinitáskromatográfiához használt közeget egy fémkelátképző ligandum (iminodiecetsav) Sepharose-hoz kapcsolásával hozzuk létre.
Mi az ionaffinitás kromatográfia?
Az ioncserélő kromatográfiában a molekulákat a szilárd fázisú anyaggal való általános ionos kölcsönhatásuk erőssége szerint választják el (azaz nem specifikus kölcsönhatások). Ezzel szemben az affinitáskromatográfia (más néven affinitástisztítás) a molekulák közötti specifikus kötési kölcsönhatásokat használja fel .
Biotechnika | A His-címkék és a nikkel-affinitáskromatográfia elkészítésének alapjai
Mire használják az affinitásos tisztítást?
Az affinitás-tisztítás, más néven affinitáskromatográfia, egy laboratóriumi technika, amelyet fehérje vagy fehérjekomplexek tisztítására használnak egy biokémiai keverékben .
Mi az ionkromatográfia elve?
Az ioncserélő kromatográfia a kulonbikus (ionos) kölcsönhatások alapján megtartja az analit molekulákat az oszlopon . Az ioncserélő kromatográfiás mátrix pozitív és negatív töltésű ionokból áll. Lényegében a molekulák elektrosztatikus kölcsönhatásokon mennek keresztül az állófázisú mátrixon ellentétes töltésekkel.
Miért használnak kelátképző szereket a fémionok extrakciójában?
Nehézfém-méregtelenítés A kelátképző terápia a higany-, arzén- és ólommérgezés ellenszere. A kelátképző szerek ezeket a fémionokat kémiailag és biokémiailag inert formává alakítják, amely kiválasztódik .
Miért jó az imidazol eluálószer?
Az imidazolt kompetitív szerként használják a hisztidinnel jelölt fehérjék eluálására . Ezenkívül az imidazol kis koncentrációban adható a mintához és a kötőpufferhez a szennyező fehérjék kötődésének csökkentése és ezáltal a végső tisztaság növelése érdekében.
Mi az a Ni NTA?
A Ni-NTA Agarose egy nikkeltöltött affinitásgyanta , amely polihisztidin (6xHis) szekvenciát tartalmazó rekombináns fehérjék tisztítására használható. ... A Ni-NTA a kelátképző ligandum nitrilo-triecetsavat (NTA) használja térhálósított 6%-os agaróz gyantához kapcsolva, amely alkalmas szakaszos és gravitációs áramlási alkalmazásokra.
Miért használjunk His-címkét?
Az egyik leggyakrabban használt jelölés a polihisztidin jelölés, más néven His-Tag, amely általában hat és kilenc hisztidin csoportból áll (lásd az alábbi 1. ábrát). Ez a jelölési módszer különösen hasznos, mivel lehetővé teszi a rekombináns fehérje könnyű tisztítását és kimutatását.
Miért hasznos az affinitáskromatográfia?
Az affinitáskromatográfia egy biomolekula elegyből való elválasztásának módszere, amely a biomolekula és egy másik anyag közötti rendkívül specifikus makromolekuláris kötési kölcsönhatáson alapul. ... Az affinitáskromatográfia hasznos nagy szelektivitása és elválasztási felbontása miatt , összehasonlítva más kromatográfiás módszerekkel.
Hogyan eluálja az imidazol a címkét?
Jellemzően alacsony koncentrációjú imidazolt adnak mind a kötő-, mind a mosópufferekhez, hogy megzavarják más fehérjék gyenge kötődését, és eluálják a gyengén kötődő fehérjéket. A His-jelölt fehérjét ezután magasabb koncentrációjú imidazollal eluáljuk.
Melyik fémet használják a kromatográfiában?
A töltött oszlopokhoz a rozsdamentes acél és az üveg , a kapilláris oszlopokhoz pedig a kvarc vagy olvasztott szilícium-dioxid a szokásos anyag. A gázkromatográfia az analit megoszlási egyensúlyán alapul egy szilárd vagy viszkózus folyékony állófázis (gyakran folyékony szilikon alapú anyag) és egy mozgó gáz (leggyakrabban hélium) között.
Hogyan kötődik a nikkel a hisztidinhez?
Amikor egy His-címkével rendelkező fehérjét érintkezésbe hoznak egy hordozóval, amelyen fémion, például nikkel van rögzítve pH 8 vagy magasabb érték mellett, a hisztidin maradék keláttá alakítja a fémiont, és megkötődik a hordozóhoz.
Milyen fehérje tulajdonságait használja ki az immobilizált fémaffinitás kromatográfiás IMAC a tisztításhoz?
Ez a technika kihasználja (i) természetes felületi hisztidin-, cisztein- és triptofán-maradékokat tartalmazó fehérjék és (ii) mesterséges hisztidin-címkékkel vagy hisztidin-klaszterekkel rendelkező rekombináns fehérjék affinitását semleges pH-értéken, hogy komplexeket képezzenek kelátos fémionokkal, például Zn 2 -vel. + , Cu 2 + , Ni 2 + , Cd 2 + , ...
Mi az imidazol pH-ja?
Az imidazol pufferként használható 6,2-7,8 pH-tartományban 25 °C-on . Puffer komponensként a torma-peroxidáz meghatározásához, valamint kelátképzőként a különböző kétértékű kationok megkötéséhez ajánlott.
Milyen kromatográfiát használnak a só eltávolítására a fehérjemintákból?
A sótalanítást a fehérjeoldatokból származó sók, a nukleinsavakból a fenol vagy a nem beépült nukleotidok, illetve a konjugált fehérjékből a felesleges térhálósító vagy jelölő reagensek eltávolítására használják.
Hogyan lehet megszabadulni az imidazoltól?
Ha szükséges az imidazol eltávolítása, akkor az eltávolítható dialízissel , ammónium-szulfátos kicsapással, ultraszűréssel vagy méretkizárásos sótalanító oszlop használatával.
Miért hatékony komplexképző az EDTA a fémionok számára?
Az EDTA egy sokoldalú kelátképző szer. Négy-hat kötést tud kialakítani egy fémionnal, és kelátokat képez mind az átmenetifém-ionokkal, mind a főcsoport-ionokkal. ... Az EDTA deaktiválja ezeket az enzimeket azáltal, hogy eltávolítja belőlük a fémionokat, és stabil kelátokat képez velük.
Mi a legjobb kelátképző szer?
Az ólom és más nehézfém-kelátképzők közé tartozik a szukcimer (dimerkaptonol), a dimerkaprol (BAL) és az etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA). A Succimer szájon át beszerezhető, és hatékonyabbnak és jobban tolerálhatónak tűnik, mint a többi, intravénás beadást igénylő terápia.
Milyen kelátképző szereket használnak fémionok extrakciójához?
Nitrilo-triecetsav (NTA) A nitrilo-triecetsav (NTA, C 6 H 9 NO 6 ), egy poliamino-karbonsav, és kelátképző szerként is használják, amely koordinációs vegyületeket (kelátokat) képez fémionokkal, például Ca 2 + , Cu 2 + vagy Fe 3+ . Az NTA felhasználási területei nagyon hasonlóak az EDTA-hoz.
Mik az ionkromatográfia előnyei?
Az ionkromatográfia legfontosabb előnyei az alkalmazások széles skálája, a jól fejlett hardver, a sok detektálási lehetőség , a megbízhatóság jó pontossággal, a nagy szelektivitás, a nagy sebesség, a nagy elválasztási hatékonyság, a mintamátrixokkal szembeni jó tolerancia és a fogyóeszközök alacsony költsége. .
Mire használják az ionkromatográfiát?
Az ionkromatográfiát olyan vizes minták elemzésére használják, amelyek ppm mennyiségű közönséges aniont (például fluoridot, kloridot, nitritet, nitrátot és szulfátot) tartalmaznak.
Mi az IC műszer?
Az ionkromatográfiás (IC) rendszerek elválasztják a töltött részecskéket a folyadéktól, és mérik azok koncentrációját. Az IC rendszerek képesek elemezni olyan részecskéket, mint az anionok, kationok, szerves sók és fehérjék. Használják a környezetvédelmi, gyártási, élelmiszer-, gyógyszer- és vegyiparban.